含有WW结构域的氧化还原酶的基因对人骨肉瘤细胞MG-63的生长抑制的作用及机制

摘要

背景:
　　 骨肉瘤是目前最常见的原发恶性骨肿瘤，好发于青少年男性，早期可发生肺转移，预后差，死亡率和致残率高，严重危害人类健康。骨肉瘤的发生和发展是多阶段和多基因参与的过程，但骨肉瘤的发病机制和参与基因尚未确切阐明。过去对骨肉瘤的研究局限于基因及染色体变异，发现P53、P16和MDM等基因的点突变、扩增、缺失与骨肉瘤的发生发展有密切的关系。随着对骨肉瘤的分子病理学研究的逐渐深入，基因的表观遗传学改变尤其是甲基化对骨肉瘤的发生发展的作用逐渐得到重视。DNA甲基化是常见的基因表达修饰方式，存在于几乎所有高等动物，能关闭特定基因的活性。DNA甲基化目前是医学界关注热点，CpG岛甲基化是甲基化的一种常见形式，在人类基因组中大约有4万个CpG序列，位于基因的启动子区或者第一位外显子区，CpG序列在基因组出现频率较低，但在特定区域内，CpG序列密度较高并发挥重要作用，正常情况下，CpG序列的位点处于非甲基化情况，只有CpG序列的胞嘧啶能够被甲基化并使基因失去作用。甲基化的改变是肿瘤发生发展过程中的重要因素，包含CpG岛甲基化水平的异常升高，从而可以引起基因组的不稳定，包括染色体的变异，癌基因的表达升高和抑癌基因的表达降低。目前肿瘤甲基化的研究对抑癌基因的失活比较关注，抑癌基因是对正常细胞增殖发挥负性调节作用的基因，其编码的蛋白质能减低和抑制细胞的分裂，一般只有两等位基因都失去作用时才出现肿瘤，作为抑癌基因失去功能的第三种方式，抑癌基因的甲基化一般都发生在CpG岛，一般不发生在基因的编码区。5'端启动子区的CpG位点可出现甲基化使抑癌基因失活，在恶性肿瘤比较常见，但是在良性肿瘤比较少见。含有WW结构域的氧化还原酶的基因(WWOX)是位于普通脆性位点FRA16D的抑癌基因，常因CpG岛甲基化而失活导致肿瘤产生，大量研究发现，WWOX基因的失活在多种恶性肿瘤中发生率较高，研究证实，WWOX失活导致恶性肿瘤的机制与细胞凋亡的失调有关。目前已证实WWOX在多种恶性肿瘤中发挥抑癌基因作用，在已构建的WWOX基因缺陷小鼠中，大约31％在幼鼠阶段即发生骨肉瘤，因此可以推测WWOX失活与骨肉瘤的发生有关，但具体作用及机制尚需要进一步研究。
　　 目的:
　　 探讨含有WW结构域的氧化还原酶的基因(WWOX)的表达对人骨肉瘤细胞系MG-63的生长抑制作用及机制。
　　 方法:
　　 对入骨肉瘤细胞MG-63进行培养，进行质粒转染，建立稳定表达WWOX的骨肉瘤细胞模型，分为对照组，转染空白质粒组和转染WWOX组，流式细胞仪Annexin V/PI双染色法检测MG-63的凋亡，应用SPSS17.0统计软件分析，结果以均数±标准差((x)±s)表示，采用多个样本均数两两比较和单因素方差分析。
　　 结果:
　　 建立稳定表达WWOX的骨肉瘤细胞模型，流式细胞仪Annexin V/PI双染法显示转染WWOX组骨肉瘤细胞较转染WWOX组和对照组凋亡明显增加[(8.21±0.03)％比(1.13±0.03)％比(1.12±0.02)％，P＜0.05]，转染WWOX组的WWOX mRNA表达明显增加(1.612±0.072)，WWOX蛋白表达明显升高(1.680±0.072)，与其他组相比差异有统计学意义(P＜0.05)，转染WWOX组的bcl-2mRNA表达明显降低(0.194±0.088)，bcl-2蛋白表达明显降低(0.236±0.053)，其他组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　 结论:
　　 1.转染入的WWOX基因能够使WWOX在骨肉瘤细胞中的表达升高。
　　 2.转染入的WWOX基因能够使在骨肉瘤细胞中的bcl-2表达降低。
　　 3.转染入的WWOX基因能够对骨肉瘤细胞的生长起抑制作用，使骨肉瘤细胞的凋亡增加。

目录

声明

摘要

缩略词表

前言

实验材料与方法

材料

实验方法

结果

1．流式细胞仪结果

2．RT-PCR结果

3．Western blot结果

讨论

参考文献

综述

个人简历

在学期间发表的学术论文与研究成果

致谢