CD163+肿瘤相关性巨噬细胞在恶性胸腔积液鉴定与治疗中的意义

摘要

恶性胸腔积液是许多肿瘤的一种常见的晚期临床症状，包括肺癌和乳腺癌等。利用细胞学检测法来鉴定胸腔积液是良恶性存在敏感性较低、主观性较强的弊端，容易造成漏诊或误诊，另外化疗药灌注伴随有严重的毒副作用，因此需要寻找新的更敏感可靠的检测指标是非常重要的。一些研究已经证实了巨噬细胞在恶性胸腔积液肿瘤微环境中作为一种调节性细胞发挥着重要的作用。我们猜测肿瘤相关性巨噬细胞可以作为鉴定恶性胸腔积液较为敏感的生物学标志与治疗的靶点。本实验中我们选取50例恶性胸腔积液患者以及50例非恶性胸腔积液患者的胸腔积液与外周血，其中恶性胸腔积液均经细胞学鉴定发现有肿瘤细胞。采用流式细胞仪检测了巨噬细胞亚型，再利用qRT-PCR技术分析了恶性与非恶性胸腔积液患者的CD14+单核/巨噬细胞相关基因的表达水平。然后采用双盲实验进行进一步验证;采用统计学方法Student'st-test、秩和检验以及ROC进行分析，结果发现在所有胸腔积液中均表达CD14+巨噬细胞，并且在恶性胸腔积液中高表达，与非恶性胸腔积液比较差异具有统计学意义(p＜0.05)。在恶性胸腔积液中高表达抑炎性细胞因子，在非恶性胸腔积液中高表达促炎性细胞因子(p＜0.05)。提示恶性胸腔积液是一种免疫抑制性微环境。更重要是CD163+CD14+细胞在恶性胸腔积液中特异性高表达，与炎性胸腔积液相比差异具有统计学意义。但是在外周血中几乎不表达。当选取3.65％作为Cutoff值时，CD163+CD14+做为鉴定肺癌患者恶性胸腔积液的特异性为100％,敏感度为86％，在40例双盲实验中，特异性为100％，敏感度为78.9％，共140例胸腔积液的检测结果显示CD163+CD14+巨噬细胞在恶性胸腔积液中特异性高表达，进一步验证CD163+CD14+巨噬细胞可以作为恶性胸腔积液的特异性标志。并且发现CD163+CD14+巨噬细胞(M2型TAM)，主要分泌抑炎性细胞因子，因此促进M2型向M1型巨噬细胞转化可以作为治疗恶性胸腔积液的新战略。铜绿假单胞菌已经被证实通过活化固有免疫细胞包括巨噬细胞、DC细胞进而激活免疫系统，本实验中通过CD14磁珠分离来自恶性胸腔积液患者的单核细胞，体外加入铜绿假单胞菌药物处理6h，利用qRT-PCR技术分析恶性胸腔积液中TAM相关基因在加药处理后基因水平的变化。结果显示抑炎性细胞因子如Arginase-Ⅰ、TGF-β下调，促炎性细胞因子如iNOS，TNF-α上调，另外药物作用会诱导肿瘤相关性巨噬细胞高表达TLR4。总之，铜绿假单胞菌可以通过上调TLR4进而逆转肿瘤相关性巨噬细胞的表型与功能，因此我们提出初步的理论，认为高表达CD163的巨噬细胞可以作为恶性胸腔积液鉴定与治疗的新的靶点。

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摘要

英文缩写一览表

第1章 引言

1．1 恶性胸腔积液微环境的研究

1．2 铜绿假单胞菌注射液对恶性胸腔积液的临床治疗

1．3 研究目的和意义

1．4 研究内容与方法

1．5 实验流程图

第2章 胸腔积液免疫微环境的研究与CD163+TAM细胞鉴定恶性胸腔积液

2．1 材料

2．2 方法

2．3 结果

2．4 讨论

第3章 PA-MSHA重塑恶性胸腔积液中肿瘤相关性巨噬细胞的表型与功能

3．1 材料

3．2 方法

3．3 结果

3．4 讨论

第4章 PA-MSHA逆转TAM对NK杀伤抑制的功能

4．1 材料

4．2 方法

4．3 结果

4．4 讨论

第5章 恶性胸腔积液患者临床灌注PA-MSHA前后CD163+TAM细胞的表达与临床疗效的关系

5．1 材料

5．2 方法

5．3 结果

5．4 讨论

全文讨论

全文结论

参考文献

致谢

硕士期间发表论文、专利目录及研究成果