灵芝、NT-3和FGF-2对海马EGF反应性神经干细胞分化为神经元的诱导作用

摘要

目的：比较灵芝、神经营养素3(NT-3)和碱性成纤维细胞生长因子(FGF-2)对新生大鼠海马表皮生长因子反应性神经干细胞(EGFr-NSC)分化为神经元的诱导作用。 方法：在含EGF的培养体系中分离培养NSC，免疫荧光染色检测NSC特征性标志nestin的表达，Brdu掺入实验检测细胞增殖状态。将NSCs接种在24孔培养板中，分成6组，每组4孔：对照组、灵芝组、NT-3组、FGF-2组、FGF-2+NT-3组和FGF-2+NT-3+灵芝组。其中灵芝为1ug/ml，NT-3为40ng/ml，FGF-2为20ng/ml。隔天换液一次，培养10d时，用免疫细胞化学染色和荧光标记技术检测其神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达，并计算阳性染色细胞的百分率。 结果：EGF反应性NSC生长和增殖速度快，细胞迁移和分化不明显，细胞间结合疏松，机械吹打后易成单细胞悬液，且具有连续克隆能力。经与Brdu共孵育后培养形成的神经球，92﹪左右细胞Brdu表达阳性。连续传代7次后形成的悬浮细胞球仍为nestin表达阳性。诱导分化后可得到具有网状联系的呈NSE阳性的神经元样细胞。分化后各组的神经元比例分别为3.70﹪、8.94﹪、14.20﹪、19.69﹪、34.10﹪、35.18﹪。 结论：EGF为海马NSC体外培养适宜的丝裂原。灵芝、NT-3和FGF-2单独或联合应用均可提高大鼠海马EGF反应性NSC分化为神经元的比例，FGF-2与NT-3有协同效应，灵芝与FGF-2、NT-3无协同作用。

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