槲皮素体外逆转K562/ADM细胞耐药的研究

摘要

目的：以人红白血病多药耐药细胞系K562/ADM为研究对象，观察经槲皮素逆转后，K562/ADM对阿霉素敏感性的变化，并阐述其作用机制。 方法：1、实验组为下列几组：①K562/ADM耐药细胞组。②阿霉素+K562/ADM耐药细胞组。③槲皮素+K562/ADM耐药细胞组。④槲皮素+ADM+K562/ADM耐药细胞组。 2、以噻唑蓝MTT法检测K562/ADM细胞的耐药性，观察经槲皮素逆转后，阿霉素对K562/ADM细胞的抑制率、IC50、逆转倍数及K562/ADM对阿霉素敏感性变化，评价槲皮素对耐阿霉素K562细胞逆转效果； 3、以AO-EB荧光染色法根据AO、EB荧光染色剂与不同生长状态细胞结合不同，双染阿霉素作用下K562/ADM细胞，观察槲皮素逆转后K562/ADM细胞在荧光显微镜下颜色及生长形态，根据细胞在荧光显微镜下呈现不同颜色数目及生长形态改变，评价经槲皮素逆转后，阿霉素对K562/ADM细胞细胞毒作用的变化，槲皮素对K562/ADM细胞逆转效果； 4、以化学比色法测定经阿霉素作用下经槲皮素逆转后K562/ADM细胞内GST活力值，观察K562/ADM在槲皮素逆转后细胞内GST活力变化特点，并以GST介导的药物转运能力、与细胞内与药物代谢相关物质解毒功能发生改变等为出发点，探讨槲皮素逆转机制，旨在为临床逆转MDR提供新的策略及理论依据。 结果：1、MTT实验中：①10umol/L、30umol/L、90umol/L槲皮素对K562/ADM抑制率分别为：14.409±1.229、22.836±1.110、49.543±2.729，IC50为91.156umol/L。②10umol/L、30umol/L、90umol/L阿霉素对K562/ADM抑制率分别为：16.546±3.624、34.664±2.279、61.089±2.714，IC50为66.338umol/L。③10umol/L槲皮素逆转作用下，10umol/L、30umol/L、90umol/L阿霉素对K562/ADM抑制率分别上升到19.973±1.765、38.051±1.988、63.777±0.786。④30umol/L槲皮素逆转作用下，10umol/L、30umol/L、90umol/L阿霉素对K562/ADM抑制率分别上升到31.088±0.926、47.003±1.026、72.594±1.447。⑤90umol/L槲皮素逆转作用下，10umol/L、30umol/L、90umol/L阿霉素对K562/ADM抑制率分别上升到40.027±1.058、58.253±0.971、81.720±1.345。⑥经10umol/L、30umol/L、90umol/L槲皮素逆转后，阿霉素对K562/ADM的IC50由66.338umol/L分别下降到60.822umol/L、42.938umol/L、23.846umol/L；逆转倍数分别为1.091、1.545、2.782。 2、AO-EB实验中：①相同浓度阿霉素作用下，槲皮素逆转后呈现红色/橘红色K562/ADM细胞数目多于未用槲皮素逆转组，细胞形态相对不规则、肿胀，细胞膜较凹陷，染色相对不均匀。②10umol/L槲皮素逆转组中呈现红色/橘红色K562/ADM细胞数目少于30umol/L槲皮素逆转组及90umol/L槲皮素逆转组，90umol/L槲皮素逆转组中红色/橘红色细胞数目最多。 3、GST实验中：①10umol/L、30umol/L、90umol/L阿霉素作用K562/ADM后细胞内GST活力测定值分别为：81.927±1.781、69.919±2.057、47.154±1.781。②经10umol/L槲皮素逆转作用下，10umol/L、30umol/L、90umol/L阿霉素作用K562/ADM后，细胞内GST活力测定值分别为81.301±3.411、67.209±2.448、44.444±3.359。③经30umol/L槲皮素逆转作用下，10umol/L、30umol/L、90umol/L阿霉素作用K562/ADM后，细胞内GST活力测定值分别为70.894±2.507、60.163±3.411、35.230±3.197。④经90umol/L槲皮素逆转作用下，10umol/L、30umol/L、90umol/L阿霉素作用K562/ADM后，细胞内GST活力测定值分别为63.415±2.057、52.033±2.057、25.474±3.197。 结论：1、槲皮素单独对K562/ADM有抑制作用，在相同浓度下，抑制率小于阿霉素。 2、槲皮素能够逆转K562/ADM对阿霉素的耐药，逆转强度呈剂量依赖性。其逆转机制主要不是自身增强K562/ADM的抑制作用，而是下调细胞内GST的活力，减少GST对阿霉素的外排，提高阿霉素对K562/ADM抗白血病作用。 3、槲皮素有望成为临床上在耐阿霉素白血病治疗中有效的逆转剂。

目录

学术诚信承诺及关于论文使用授权的说明

前言

文献综述

材料与方法

结果

讨论

结论

附图

参考文献

致谢

英文缩写