鸡尾酒免疫组化双染法提高肿瘤细胞Ki-67指数准确性的研究

摘要

Ki-67是一种与细胞增殖密切相关的核抗原，其单克隆抗体能标记除G0期以外的所有细胞分裂周期中。因此，Ki-67抗体免疫组织化学染色表达率（Ki-67指数（Ki-67 LI））可能接近肿瘤的增殖活性。目前，Ki-67抗体在临床主要用于标记肿瘤组织中增殖较快的肿瘤细胞，Ki-67指数是应用最为广泛的用于评价肿瘤细胞增殖活性的指标之一。
　　然而，在病理诊断工作中，要准确在肿瘤组织中标记到增殖的肿瘤细胞并不是一件容易的事情，主要原因是：
　　（1）Ki-67抗体可以用于标记所有处于增殖期的细胞，不仅限于增殖期的肿瘤细胞,而且可在其他类型的增殖期细胞中表达。
　　（2）在肿瘤组织中，经常伴有炎细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞等多种细胞成分。
　　（3）在肿瘤细胞稀少的组织中，炎细胞有时可以成为其主要成分。此时的Ki-67抗体指数则表现的是大量炎细胞的增殖情况，而不能准确代表肿瘤组织中肿瘤细胞增殖情况。因此，目前临床上常用到的Ki-67指数来表示肿瘤组织的增殖情况，并不十分准确。
　　近年来，免疫组化双染法的应用及成熟为准确检测肿瘤细胞Ki-67指数提供了可行的办法。对于表达特异性标记的肿瘤，如神经内分泌肿瘤可特异性表达Syn抗体，与Ki-67抗体进行双染，呈现双阳性的细胞即是增殖期的肿瘤细胞。而在脑膜瘤组织中有大量增殖期的淋巴细胞，淋巴细胞可以表达特异性抗原LCA，应用免疫组化双染法同时标记LCA抗体及Ki-67抗体，并使其呈现不同的颜色，那么同时表达两种颜色的细胞则为增殖期淋巴细胞，应从肿瘤细胞Ki-67阳性细胞计数中除去，由此则可以更加准确的判断脑膜瘤组织中肿瘤细胞Ki-67指数，可更加准确的推断肿瘤增殖情况。目前，国内外还缺乏在这方面的相关研究。本研究主要用到鸡尾酒免疫组化双染法来精确肿瘤细胞Ki-67指数，从而更加准确的推断肿瘤组织的增殖情况，为临床用药和预估患者预后提供更加可靠的依据。
　　目的：
　　本研究主要探讨应用鸡尾酒免疫组化双染法，在组织中得到更加准确的肿瘤细胞Ki-67指数，从而更加准确的判断肿瘤的增殖活性。
　　方法：
　　1.选取胃肠神经内分泌肿瘤组织标本30例和脑膜瘤组织标本29例。
　　2.常规免疫组化Elivision两步法：对30例胃肠神经内分泌肿瘤组织，分别进行 Ki-67抗体单项标记和Syn抗体单项标记，对29例脑膜瘤组织分别检测Ki-67抗体和LCA抗体的表达情况。
　　3.鸡尾酒免疫组化双染法:对30例胃肠神经内分泌肿瘤组织进行Ki-67抗体和Syn抗体双项标记，对30例脑膜瘤组织进行Ki-67抗体和LCA抗体双项标记。并统计Ki-67指数和肿瘤细胞Ki-67指数。
　　4.用medcal9.2统计软件，Bland-Altman分析法检测常规免疫组化单染法和鸡尾酒免疫组化双染法在检测 Ki-67指数方面这两种方法的一致性，用Bland-Altman分析法和配对t检验检测常规免疫组化单染法中Ki-67指数和鸡尾酒免疫组化双染法中肿瘤细胞Ki-67指数之间的差异。
　　结果：
　　胃肠神经内分泌肿瘤组织和脑膜瘤组织检测结果（两种肿瘤检测结果一致）：
　　①对单染Ki-67指数和双染时Ki-67指数进行Bland-Altman分析，结果显示两组数据具有较高的一致性，提示免疫组化双染法不会造成Ki-67总指数的增多或减少，双染的方法是可靠的免疫组化方法；
　　②单染的Ki-67指数和鸡尾酒双染法的肿瘤细胞Ki-67指数进行Bland-Altman分析，结果表明单染的Ki-67指数高于鸡尾酒双染时肿瘤细胞Ki-67指数；
　　③单染的Ki-67指数和鸡尾酒双染法的肿瘤细胞Ki-67指数进行配对t检验，差异有统计学意义，p＜0.05。
　　结论：
　　(1)鸡尾酒免疫组化双染法不会造成Ki-67总指数的上升或降低，是可靠的免疫组化法。
　　（2）Ki-67/Syn双抗体鸡尾酒双染法可以提高胃肠神经内分泌肿瘤组织中肿瘤细胞Ki-67指数的准确性，而Ki-67/LCA双抗体鸡尾酒双染法同样也可以提高脑膜瘤组织中肿瘤细胞Ki-67指数的准确性。

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中英文缩略词表

前言

材料与方法

1 实验材料

3.3 组织标本来源

1.2 临床病历资料

1.3 主要试剂

1.4 主要实验设备

1.5 主要试剂配制

2 试验方法

2.1 组织切片制备

2.2 免疫组织化学染色

2.3 结果判定

2.4 统计分析

实验结果

一、胃肠神经内分泌肿瘤

二、脑膜瘤

讨论

结论

参考文献

综述: Ki-67抗体与胃肠神经内分泌肿瘤及脑膜瘤的相关研究

个人简历

致谢