高危型HPV感染宫颈癌及癌前病变患者E6/E7 mRNA与p16、p53、ki67表达的相关性研究

摘要

目的：目前宫颈癌是女性生殖系统最为常见的恶性肿瘤，严重威胁妇女的健康。宫颈癌的发生和发展是一个渐进的演变过程，浸润型宫颈癌是由长达数年至数十年的宫颈上皮内病变（Cervical Intraepithelial Lesion，可分为High-gradeSquamous Intereapithelial Lesion, HSIL; Low-grade Squamous IntereapithelialLesion，LSIL)发展而来的。高危型人乳头状瘤病毒(Human Papihoma Virus，HPV)持续感染是宫颈癌患者的始发病因也为重要影响因素，几乎所有的宫颈癌患者均伴有高危型HPV感染。p16、p53均为肿瘤抑制基因，其异常表达与多种肿瘤的发生发展具有密切的相关性。ki67是一种与细胞增殖相关的核抗原，参与细胞有丝分裂，为目前临床上广泛应用的检测细胞增殖的指标。本研究主要探讨高危型HPV感染宫颈癌及其癌前病变患者E6/E7 mRNA与p16、p53、ki67表达的相关性，旨在用宫颈脱落细胞（非创伤）预知高危型HPV感染患者发生宫颈癌变的可能性，并且分析以上指标与影响宫颈癌预后的相关临床病理因素之间的关系，为宫颈癌患者预后的评估指明方向。
　　方法:
　　实验标本:
　　收集郑州大学附属肿瘤医院妇科2014年1月至2015年1月宫颈组织活检/锥切或手术标本及其相对应的宫颈液基薄层细胞学标本共405例，其中宫颈癌患者182例，患者中位年龄50岁（28～80岁），标本选取标准:均为初治、组织病理学确诊为宫颈鳞状上皮细胞癌，未接受过化疗及盆腔放射治疗。宫颈上皮内病变患者190例:LSIL92例，HSIL98例，患者中位年龄50岁(30～63岁)。同期选取因其他病变切除子宫的正常宫颈组织33例用于对照，均未感染高危型HPV，患者中位年龄50岁（33～78岁）。
　　实验方法:
　　采用免疫组织化学SOP的方法检测405例标本p16、p53及ki67蛋白的表达水平，杂交捕获二代技术(Hybrid Capture2，HC.2)检测HPV DNA的感染情况，支链DNA技术(branched DNA，bDNA)检测HPV E6/E7 mRNA的阳性表达情况。并分析HPV E6/E7 mRNA与p16、p53及ki67蛋白阳性表达之间的关系及其它们与影响宫颈癌预后的临床病理因素之间的相关性。同时建立淋巴结转移情况与HPV E6/E7 mRNA、p16及p53蛋白表达水平之间的logistic回归模型。采用SPSS21.0统计软件进行X2检验、Fisher's精确概率法、Spearman等级相关分析及logistic回归分析，P＜0.05为差异有统计学意义。
　　结果：
　　1 HPV E6/E7 mRNA、p16、p53、ki67蛋白在正常宫颈组织、LSIL、HSIL、宫颈癌组织中的阳性率分别为:0％，50％，80.61％，89.01％;3.03％，39.13％,64.29％,66.4％;9.09％,20.65％,52.04％,65.38％;3.03％,44.57％，70.40％，74.73％，结果显示阳性率均随着病变严重程度的增强而呈现逐渐上升的趋势，差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　2正常宫颈组织中无HPV感染，LSIL中HPV感染者66例，感染率(66/92，71.74％)，HSIL中HPV感染者94例，感染率(94/98，95.92％)，宫颈癌组织中HPV感染者182例，感染率(182/182，100％)，HPV感染率随着病变严重程度的增强呈现逐渐上升的趋势，差异有统计学意义(P＜0.05)，其中 HPV16的检出率最高为45.9％，HPV58位于第二位，所占比率为8.79％。
　　3 LSIL中HPV E6/E7 mRNA与p16蛋白表达之间不具有相关性P=0.669;HPV E6/E7 mRNA与p53蛋白表达之间不具有相关性P=0.440; HPV E6/E7mRNA与ki67蛋白表达之间不具有相关性P=0.294。HSIL中HPV E6/E7mRNA与p16蛋白表达之间呈现正性相关性r=0.658，P=0.000; HPV E6/E7mRNA与p53蛋白表达之间呈现正性相关性r=0.511，P=0.000; HPV E6/E7mRNA与ki67蛋白表达之间不具有相关性P=0.183。
　　4宫颈癌组织中HPV E6/E7 mRNA的阳性率与临床分期、淋巴结转移情况有关（P＜0.05），与组织病理学分级、年龄不具有相关性(P＞0.05);多重亚型感染与年龄有关(P＜0.05)，与淋巴结转移情况、临床分期、组织病理学分级不具有相关性(P＞0.05); p16蛋白的阳性率与组织病理学分级、淋巴结转移情况有关（P＜0.05），与临床分期、年龄不具有相关性（P＞0.05）;p53蛋白的阳性率与临床分期、淋巴结转移情况、组织病理学分级有关(P＜0.05)，与年龄不具有相关性(P＞0.05);ki67蛋白的阳性率与临床分期有关(P＜0.05)，与组织病理学分级、淋巴结转移及年龄不具有相关性（P＞0.05）。
　　5 HPV E6/E7 mRNA、p16及p53蛋白表达水平与淋巴结转移情况之间的logistic回归模型的建立及其分析:logistic回归模型为:logit(P)=7.900+3.163×p16+2.693×HPV E6/E7 mRNA+3.414×p53。由此模型可知，p53、HPV E6/E7 mRNA、p16均可进入方程，即都可影响淋巴结转移，按其作用的程度由强到弱依次为:p53(OR=30.394，95％ C.I.:3.635～254.109)，p16(OR=23.636,95％ C.I.:4.981～112.158), HPV E6/E7 mRNA(OR=14.777,95％ C.I.:2.977～73.341)。此模型判断淋巴结转移与否的特异度为79.38％(77/97)，灵敏度为94.12％(80/85)，准确度为84.54％(82/97)。
　　结论:
　　1 HPV E6/E7 mRNA、p16、p53、ki67的阳性表达均可能会推动宫颈病变的发生发展。
　　2宫颈病变恶性程度越高HPV感染率越高，且所有HPV感染女性中HPV16为最常见的感染类型，HPV58位于第二位。
　　3 HISL中HPV E6/E7 mRNA与p16蛋白、p53蛋白表达之间均具有正性相关性，因此可以在宫颈脱落细胞中检测HPV E6/E7 mRNA的表达情况，在非创伤情况下预知高危型HPV感染患者发生宫颈癌变的可能性，从而提前干预和阻断宫颈癌变的发生发展。
　　4 HPV E6/E7 mRNA、p16、p53、ki67蛋白的阳性表达率及HPV单一及多重亚型感染情况可用于评估宫颈癌患者的预后。
　　5 HPV E6/E7 mRNA、p16、p53蛋白的表达水平与淋巴结转移情况密切相关，三者的联合检测对预测淋巴结转移与否意义重大，可以用于预测患者在HPV E6/E7 mRNA、p16、p53不同表达的情况下发生淋巴结转移的概率。

目录

声明

摘要

中英文缩略语表

1 前言

2 材料与方法

2．1 研究对象

2．2 实验试剂

2．3 主要仪器

2．4 免疫组织化学的方法检测p16、p53、ki67的表达

2．5 杂交捕获二代技术(HC-2)检测HPV DNA感染亚型

2．6 支链DNA技术定量检测HPV E6／E7mRNA

2．7 统计学方法

3 实验结果

3．1 正常宫颈组织、LSIL、HSIL与宫颈癌组织中HIPV E6／E7 mRNA、p16、p53、ki67蛋白的表达

3．2 正常宫颈组织、LSIL、HSIL与宫颈癌组织中HPV感染类型分析

3．3 LSIL及HISL中HPV E6／E7 mRNA与p16、p53、ki67蛋白表达之间的关系

3．4 宫颈癌组织中HPV E6／E7 mRNA、p16、p53、ki67的表达及HPV多重亚型感染率与宫颈癌预后相关临床病理因素的关系

3．5 淋巴结转移情况与HPV E6／E7 mRNA、p16及p53蛋白表达水平之间logistic回归模型的建立及分析

4 讨论

4．1 高危型阳PV感染与宫颈病变发生发展的关系及临床意义

4．2 p16与宫颈病变发生发展的关系及临床意义

4．3 p53与富颈病变发生发展的关系及临床意义

4．4 ki67与宫颈病变发生发展的关系及临床意义

4．5 LSIL及HSIL中HPV E6／E7 mRNA与p16、p53、ki67蛋白表达之间的关系

4．6 淋巴结转移情况与HPV E6／E7 mRNA、p16、p53蛋白表达之间的关系

5 结论

参考文献

综述 高危型HPV感染宫颈癌及癌前病变患者E6／E7mRNA与p16、p53、ki67表达的相关性研究

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