鹿血晶对荷瘤鼠放疗后免疫功能的影响

摘要

目的:
　　迄今为止，恶性肿瘤仍旧是影响人类生命健康和生活质量的一类严重疾病，是人类疾病中的第二大杀手，手术、化疗、放疗是其治疗的三大基本手段。多数肿瘤要依靠放射治疗，但放疗缺乏对正常细胞和肿瘤细胞的选择性，射线在杀死肿瘤细胞的同时，对于正常细胞也存在杀伤作用，从而产生毒副作用，使得其存在极大的局限性，最为常见也最为关键的就是导致机体免疫力下降，严重影响患者的治疗效果和生存质量。因此，在肿瘤治疗的过程中，杀死肿瘤细胞和保护机体免疫系统同等重要。中国传统医药虽在控制肿瘤方面欠佳，但多数具有增强免疫、降低毒副作用的功效，且较为安全，在放疗辅助治疗上具备独特的优势。鹿血晶系梅花鹿血或马鹿血经炮制加工干燥后制得的产品，具有养血益精、行血祛瘀、消肿疗伤等作用。本文旨在通过观察外周血象、脾脏和骨髓组织形态、T细胞亚群及相关蛋白等的变化，评价鹿血晶对荷瘤鼠放疗后免疫功能的影响，并初步探讨其可能机制，为临床用药提供依据。
　　方法：
　　1.制备S180腹水瘤细胞悬液，建立S180荷瘤鼠模型。
　　2.分组和给药。设置正常组、荷瘤模型组、放疗组、放疗+鹿血晶组。对治疗组进行X线局部照射，10 Gy/5次，2 Gy/次，每天1次，连续5天。放疗+鹿血晶组自照射开始即灌胃给予鹿血晶混悬液，连续给药10天，于开始给药后第16天处死。
　　3.在治疗期间观察小鼠的一般情况和肿瘤生长情况，并定期检测小鼠外周血血象，观察各组小鼠在治疗期间血象的变化。
　　4.治疗结束后将小鼠处死，钝性剥离脾脏和同侧股骨制作标本，称取脾重，计算脾脏指数；制备抗凝血，采用流式细胞术检测各组小鼠外周血的T淋巴细胞亚群CD3+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞。
　　5.采用酶联免疫吸附实验（ELISA）双抗体夹心法检测各组小鼠外周血血清中细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-1表达水平。
　　6.采用免疫组化法检测各组小鼠脾脏组织中转录因子GATA3和T-bet的表达。
　　7.采用HE染色技术，观察各组小鼠脾脏和骨髓的组织形态变化。
　　结果：
　　1.荷瘤鼠接受照射后体重呈下降趋势，给药后体重下降幅度减小，肿瘤增长也较放疗组减缓。
　　2.治疗期间外周血血象检测结果表明，与模型组相比，开始照射后5天，放疗组的白细胞、淋巴细胞、红细胞数均降低，给鹿血晶后白细胞数、淋巴细胞数有回升趋势，其中与模型组相比，各治疗组淋巴细胞数变化显著（P<0.05）；尤其第10天，与模型组相比，放疗组和放疗+鹿血晶组的白细胞数、淋巴细胞数均显著下降（P<0.01），且第10天和第15天荷瘤鼠放疗+鹿血晶组的淋巴细胞数较放疗组明显升高（P<0.05）。
　　3.对脾脏指数的影响：与模型组相比，放疗组的脾脏指数有所降低，但无统计学意义。与放疗组比较，鹿血晶对放疗荷瘤鼠放疗后脾脏指数的升高作用明显（P<0.01）。
　　4.外周血 T细胞亚群检测结果表明，与模型组相比，放疗后荷瘤鼠 CD4+辅助性 T细胞亚群、CD8+杀伤性 T细胞亚群以及 CD4+/CD8+的比例均下降（P<0.05）；与放疗组相比，鹿血晶对荷瘤鼠放疗后外周血中 CD4+辅助性 T细胞亚群的数量有增强作用，CD4+/CD8+比例也增加（P<0.01）。
　　5.外周血细胞因子检测结果表明，荷瘤鼠放疗后外周血的 IFN-γ表达减少（P<0.05），给药后较放疗组荷瘤鼠外周血IFN-γ水平升高（P<0.05）；放疗荷瘤鼠外周血的IL-4表达水平上升（P<0.05），与放疗组荷瘤鼠相比，给药后荷瘤鼠外周血IL-4表达降低（P<0.05）。放疗组较模型组荷瘤鼠外周血的IL-6、IL-1表达均有增加趋势，给药后呈下降趋势，但差异未见统计学意义（P>0.05）。
　　6.免疫组化法检测各组小鼠脾脏组织中转录因子GATA3与T-bet表达，结果表明，与模型组相比，放疗组和放疗+鹿血晶组T-bet和GATA3表达均降低，放疗组T-bet表达比GATA3降幅更大，GATA3表达占优势，给药后GATA3表达明显降低（P<0.01），T-bet表达上升。说明鹿血晶能缓解放疗造成的荷瘤鼠脾脏组织中T-bet/GATA3的比值降低，使T-bet表达占优势。
　　7.病理组织学检测结果表明，给药后放疗组荷瘤鼠的脾脏、骨髓组织形态学损伤减轻。
　　结论：
　　鹿血晶对放疗引起的荷瘤鼠血象损伤尤其是T淋巴细胞损伤具有一定的保护作用，能够缓解放疗引起的体重减轻以及脾脏、造血功能损伤，并能通过调节CD4+/CD8+T细胞比例、平衡Th1/Th2型细胞因子，增强细胞免疫功能。部分机制可能与其影响T淋巴细胞转录因子T-bet和GATA3的表达有关。

目录

声明

缩略词

引言

1 实验材料

1.1 实验动物

1.2 实验药物

1.3 实验主要试剂

1.4 实验主要仪器及设备

2 实验方法

2.1 细胞悬液

2.2 建立荷瘤鼠皮下瘤模型

2.3 腹水型瘤细胞的保种冻存

2.4 实验用药品的制备

2.5 动物分组及给药方法

2.6 荷瘤鼠放疗照射方案

2.7 观察指标

2.8 数据统计处理

3 实验结果

3.1荷瘤鼠模型的成功建立

3.2各组小鼠一般情况的观察

3.3 鹿血晶对荷瘤鼠放疗后肿瘤生长的影响

3.4鹿血晶对荷瘤鼠放疗后外周血血象的影响

3.5 鹿血晶对荷瘤鼠放疗后脾脏指数的影响

3.6鹿血晶对荷瘤鼠放疗后外周血T细胞亚群的影响

3.7 鹿血晶对荷瘤鼠放疗后外周血细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-1的影响

3.8 鹿血晶对荷瘤鼠放疗后脾脏转录因子GATA3与T-bet表达的影响

3.9 鹿血晶对荷瘤鼠放疗后脾脏和股骨骨髓组织形态的影响

4 讨论

4.1 鹿血晶对荷瘤鼠外周血血象的影响

4.2 鹿血晶对荷瘤鼠脾脏指数的影响

4.3 鹿血晶对荷瘤鼠T淋巴细胞亚群的影响

4.4 鹿血晶对荷瘤鼠血清细胞因子的影响

4.5 鹿血晶对荷瘤鼠T-bet和GATA3的影响

4.6 鹿血晶对荷瘤鼠脾脏和骨髓组织形态的影响

5 结论

参考文献

综述: 免疫疗法治疗癌症的研究进展

个人简历

致谢