外源多胺对大鼠早期再生肝抗酶基因表达的影响

摘要

以部分肝切除(partial hepatectomy，PH)诱导的雄性Sprague-Dawley大鼠(体重180～20.g)再生肝为材料，采用RT-PCR和Western blotting法分别研究了外源多胺对部分肝切除后诱导的大鼠再生肝抗酶(antizyme，AZ)基因转录量和蛋白表达量变化的影响。旨在探讨多胺在肝脏再生中的作用，为阐明肝再生的机理奠定基础。大鼠随机分为7组：(1)对照组；(2)0.0.mg/kg体重精脒处理组；(3)0.15 mg/kg体重精脒处理组；(4)0.06mg/kg体重精胺处理组；(5)6 mg/kg体重精胺处理组；(6)0.0.mg/kg体重腐胺处理组；(7)20 mg/kg体重腐胺处理组。精脒、精胺、腐胺分别用0.9％NaCl溶解并稀释成一定浓度，PH0 h时皮下注射相应药物，对照组只注射0.9％NaCl。每只大鼠均注射80μl。结果如下： (1)在正常完整肝脏(PH0 h)，AZ基因转录量、蛋白表达量较低。 (2)PH后，AZ mRNA量和蛋白表达量都快速升高。3 h达到峰值，与0 h相比存在极显著性差异(P<0.01)，5 h出现明显下降，但仍显著高于0 h(P<0.05)，7 h再次升高并达到峰值，之后缓慢下降。 (3)外源多胺处理后，再生肝AZ mRNA水平和蛋白水平的变化趋势与对照组相似。但不同种类、剂量的多胺处理结果存在差异： ①在所观察到的整个肝再生期间，高剂量腐胺(20 mg/kg体重)处理组AZ mRNA水平始终高于对照组，与对照组相比存在极显著性差异(p<0.01)；低剂量(0.0.mg/kg体重)的腐胺处理组，只在3 h显著高于对照组(p<0.05)。 ②高剂量精脒(0.15 mg/kg体重)处理组的AZ mRNA水平始终高于对照组，与对照组相比存在极显著性差异(p<0.01)(12 h除外)；低剂量(0.0.mg/kg体重)处理组变化趋势与对照组相似，除PH后3 h(P<0.01)和5 h(P<0.05)外，与各相应时间点对照组相比，mRNA含量无显著性变化(P>0.05)。 ③精胺的作用与精脒相似。 ④在所观察到的整个肝再生期间，不同剂量的多胺处理后，大鼠再生肝细胞AZ蛋白水平变化和其相应时间点AZ mRNA变化相一致。 以上结果表明，不同浓度的多胺对大鼠再生肝细胞AZ基因转录和蛋白表达存在着促进作用。作用时间在肝再生刚开始3 h左右最为明显；调控的能力也有差别，精脒、精胺较强，腐胺较弱。

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论文说明：缩略语

声明

1引言

1.1肝再生

1.2多胺与肝再生

1.3抗酶研究现状以及与肝再生的关系

1.3.1抗酶的研究状况

1.3.2抗酶与肝再生

2材料与方法

2.1试剂与仪器

2.1.1试剂

2.1.2仪器

2.2试验动物及手术处理

2.2.1动物分组及处理

2.2.2多胺处理

2.2.3取材

2.3抗酶MRNA分析

2.3.1试剂的配制

2.3.2总RNA的提取

2.3.3反转录(cDNA的获得)

2.3.4 PCR

2.4抗酶蛋白分析

2.4.1试剂配置

2.4.2 Western blotting操作步骤

2.5数据处理

3结果

3.1 RNA质量检测

3.2 PCR产物电泳检测

3.3多胺对大鼠再生肝抗酶mRNA表达的影响

3.3.1对照组大鼠再生肝抗酶mRNA水平变化

3.3.2腐胺对大鼠再生肝抗酶mRNA表达的影响

3.3.3精脒对大鼠再生肝抗酶mRNA表达的影响

3.3.4精胺对大鼠再生肝抗酶mRNA表达的影响

3.4多胺对大鼠再生肝抗酶蛋白表达的影响

3.4.1对照组大鼠再生肝抗酶蛋白水平的变化

3.4.2腐胺对大鼠肝再生过程中AZ蛋白表达的调节

3.4.3精脒对大鼠肝再生过程中AZ蛋白表达的调节

3.4.4精胺对大鼠肝再生过程中AZ蛋白表达的调节

4讨论

5结论

参考文献

致谢

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