水红花子对大鼠肝再生和骨髓细胞增殖的影响

摘要

目的：按Higgins等方法制作大鼠部分肝切除模型，研究水红花子对大鼠肝再生和骨髓细胞增殖的影响，为临床治疗肝脏疾病提供实验依据和理论支持。
　　方法：通过2/3部分肝切除手术制备大鼠肝再生模型，将健康成年Wistar大鼠随机分为六组，分别为：假手术组(sham-operation，SO)、部分肝切除模型组(partialhepatectomy，PH)、环磷酰胺阳性对照组(cyclophosphamide，CP)和水红花子水提物(extract from fructus polygoni orientalis through water，EFPO)小、中、大剂量组。EFPO组大鼠分别灌胃(intragastrically，i.g.)0.9 g·kg-1、1.8 g·kg-1、3.6 g·kg-1的EFPO，阳性对照组大鼠腹腔注射(intraperitoneally，i.p.)0.03 g·kg-1的环磷酰胺注射液，PH和SO组大鼠i.g.等量的生理盐水，连续给药7天。处死动物，摘取大鼠肝脏右叶，用10％中性甲醛固定，常规脱水后石蜡包埋，制作石蜡切片。采用免疫组织化学方法，检测肝脏组织的细胞核增殖抗原(proliferating cell nuclear antige，PCNA)的表达情况；采用组织学染色方法(hematoxylin-eosin staining，HE)，观察肝脏组织的形态学变化；分别取肝脏、胸腺、脾脏，精密称重，计算各脏器指数；分离大鼠骨髓细胞，采用免疫细胞化学方法，检测骨髓细胞涂片的PCNA表达情况；用60％percoll密度梯度离心法分离纯化大鼠骨髓单个核细胞(bone marrow mononuclear cells，BMNC)，流式细胞术检测骨髓细胞周期；做大鼠骨髓印片，瑞氏-吉姆萨双染色，观察骨髓有核细胞增生程度和骨髓有核细胞形态学变化；用最大给药量评价水红花子的安全性。
　　结果：EFPO对大鼠肝再生的影响：①从肝脏组织的PCNA免疫组织化学染色可以看出，EFPO3.6 g·kg-1剂量组大鼠肝细胞PCNA的阳性表达率显著低于模型组大鼠(P<0.05)，呈剂量依赖性。②HE染色结果显示，和模型组相比，EFPO各剂量组肝细胞沿中央静脉呈放射状排列，肝血窦腔增大，EFPO3.6 g·kg-1剂量组最明显。EFPO3.6 g·kg-1剂量组可见个别细胞核增大，远离中央静脉，汇管区可见肝细胞呈轻度气球样变性，并且出现点状坏死灶。③EFPO明显抑制了肝再生大鼠肝脏、胸腺和脾脏的重量，胸腺与脾脏重量明显低于模型组(P<0.05，P<0.01)。计算各脏器指数发现，EFPO3.6 g·kg-1剂量组肝指数与模型组比较具有显著性差异(P<0.05)，EFPO1.8 g·kg-1、3.6g·kg-1剂量组胸腺指数和脾脏指数明显低于模型组(P<0.05)。EFPO对部分肝切除大鼠骨髓细胞增殖的影响：①观察部分肝切除大鼠骨髓细胞的PCNA免疫细胞化学染色，发现EFPO1.8g·kg-1、3.6 g·kg-1剂量组大鼠骨髓细胞PCNA的阳性表达率明显低于模型组大鼠(P<0.05)，提示大剂量EFPO对骨髓细胞增殖有抑制作用。②通过流式细胞仪检测骨髓细胞DNA含量和细胞周期，和模型组比较，EFPO3.6 g·kg-1剂量组G1、G2期DNA含量明显降低(P<0，05)。EFPO各剂量组G0/G1期细胞数明显增多(P<0.05)，G2/M期和S期细胞数相对减少。③吉姆萨.瑞氏双染色结果显示，与模型组相比，EFPO各剂量组有核细胞数量降低，成熟红细胞数量有所增加。与模型组相比，EFPO各剂量组大鼠骨髓有核细胞增生程度降低，CP组出现骨髓抑制现象，增生重度减低，PH和SO组骨髓增生明显活跃。水红花子灌胃给药的小鼠最大给药量为148.8 g·kg-1，相当于临床成人一日口服量的89.3倍，表明水红花子灌胃给药148.8g·kg-1是安全的。
　　结论：①EFPO抑制了大鼠肝再生：②EFPO抑制了大鼠骨髓细胞的增生，抑制程度弱于CP；③EFPO按临床成人一同口服量的89.3倍给予小鼠一日最大给药量，没有发现死亡，提示EFPO具有良好的安全性。