去迷走神经对大鼠再生肝Atf3和Nr2f1表达的影响

摘要

目的:
　　研究去迷走神经对大鼠再生肝中Atf3和Nr2f1的表达影响，进一步探讨迷走神经在肝再生过程中的作用及其调控机制。
　　方法:
　　将108只雄性大鼠分为随机的2组:PH组:2/3肝切除组;PHV组:去迷走神经2/3肝切除组。分别在术后0h、2h、12h、24h、36h、48h、72h、120h、168h处死，取大鼠的肝脏并分成两份，一份保存在中性福尔马林试剂中，另一份保存于液氮中。用免疫组织化学方法和免疫印迹法(Western Blot)检测肝组织中Atf3和Nr2f1蛋白的表达;实时荧光定量法(RT-PCR)检测肝组织中Atf3mRNA和Nr2f1 mRNA的表达。
　　结果:
　　(1)免疫组化法检测大鼠再生肝中Atf3的表达:PHV组大鼠在术后24h～36h的阳性表达量明显高于PH组(P＜0.01)，在12h和48h表达量低于PH组。
　　(2)免疫组化法检测大鼠的再生肝中Nr2f1的表达:相对于PH组来说，PHV组大鼠的表达量在术后12h、36h、48h、72h、168h低于PH组，在术后2h、24h、120h处表达量稍高于PH组，36h表达量上升到最高，在术后12h、48h和168h时与PH组有显著性差异(P＜0.05)。
　　(3)RT-PCR法检测大鼠再生肝组织中Atf3 mRNA的表达结果:与PH组相对比，PHV组的大鼠术后24h～36h肝组织内Atf3 mRNA的表达量上升，且高于PH组，在术后2h、36h和120h有显著性差异(P＜0.05)。
　　(4)RT-PCR法检测大鼠再生肝组织中Nr2f1 mRNA的表达结果:与PH组相对比，PHV组的大鼠，手术后Nr2f1 mRNA的表达量在0h～168h基本都低于PH组，在术后12h和48h有极显著差异(P＜0.05)。
　　(5)WB法检测大鼠的再生肝组织中Atf3的蛋白的表达结果:与PH组相对比，PHV组大鼠手术后至48h表达量高于PH组，在48h～120h表达量低于PH组，有显著性差异(P＜0.05)。
　　(6)WB法检测大鼠再生肝组织中Nr2f1的蛋白表达结果:与PH组相比，PHV组大鼠术后Nr2f1的蛋白量表达变化与PH组的变化相似，但整体都比PH组的表达量低，与PH组相比有显著性差异(P＜0.01)。
　　结论:
　　(1)研究结果进一步提示去迷走神经可能对大鼠肝组织再生起促进作用。
　　(2)去迷走神经对大鼠肝再生的促进作用，可能是通过促进再生肝组织中Atf3的表达，抑制再生肝组织中Nr2f1的表达来实现的。

目录

摘要

缩略语表

第一章 文献综述

1．1 肝脏结构及神经分布

1．1．1 肝脏的结构功能

1．1．2 大鼠肝脏的神经分布

1．2 迷走神经对肝脏的调节作用

1．2．1 迷走神经在肝脏中的作用

1．2．2 去迷走神经模型的建立

1．3 肝再生的研究现状

1．3．1 大鼠肝再生机理

1．3．2 雌激素与肝再生

1．3．3 正负因子对肝再生的的调控

1．4 肝再生的基因组学

1．4．1 相关基因在肝再生不同阶段的表达

1．4．2 Atf3与Nr2f1基因的研究现状

1．4．3 Atf3和Nr2f1基因与肝再生的关系

1．5 本研究的目的和意义

第二章 材料与方法

2．1 材料

2．1．1 实验动物

2．1．2 主要试剂

2．1．3 主要手术器械

2．1．4 主要仪器

2．2 动物模型的制备

2．2．1 术前准备

2．2．2 对照组动物模型建立

2．2．3 实验组动物模型建立

2．2．4 术后处理

2．3 免疫组化法检测Atf3和Nr2f1蛋白的表达

2．3．1 动物取材

2．3．2 石蜡包埋、制片

2．3．4 免疫组化法检测Atf3蛋白的表达

2．3．5 免疫组化法检测Nr2f1蛋白的表达

2．4 RT-PCR法检测Atf3 mRNA和Nr2f1 mRNA的表达

2．4．1 动物取材

2．4．2 总RNA提取与纯化

2．4．3 cDNA合成与纯化

2．4．4 RT-PCR引物设计

2．4．5 RT-PCR反应

2．5 Western blot法检测Atf3和Nr2f1蛋白的表达

2．5．1 动物取材

2．5．2 收集蛋白样品

2．5．3 蛋白含量测定

2．5．4 Western blot反应

2．6 统计学处理

第三章 结果

3．1 免疫组织化学法检测再生肝Atf3和Nr2f1蛋白的表达

3．1．1 肝切除和去迷走神经再生肝中Atf3蛋白的表达变化

3．1．2 肝切除和去迷走神经再生肝中Nr2f1蛋白的表达变化

3．2 RT-PCR法检测再生肝Atf3 mRNA和Nr2f1 mRNA的表达

3．2．1 Atf3 mRNA和Nr2f1 mRNA的RT-PCR结果

3．2．2 肝切除和去迷走神经再生肝中Atf3 mRNA表达变化

3．2．3 肝切除和去迷走神经再生肝中Nr2f1 mRNA表达变化

3．3 Western blot法检测再生肝Atf3和Nr2f1蛋白的表达

3．3．1 Western blot结果

3．3．2 肝切除和去迷走神经再生肝中Atf3蛋白的表达变化

3．3．3 肝切除和去迷走神经再生肝中Nr2f1蛋白的表达变化

第四章 讨论

4．1 大鼠去迷走神经对再生肝中Atf3表达的影响

4．2 大鼠去迷走神经对再生肝中Nr2f1表达的影响

第五章 结论

参考文献

附录

致谢

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