河南省猪乙型脑炎血清流行病学调查及乙型脑炎病毒河南地方株的分离鉴定

摘要

乙型脑炎是经蚊叮咬传播的严重威胁人畜健康的一种中枢神经系统的急性传染病。猪是乙型脑炎病毒的重要储存宿主和扩增宿主，是乙型脑炎的主要传染源。为了有效防止乙型脑炎的流行，保护人畜的安全，对河南省猪感染乙型脑炎病毒情况进行了调查研究。 本研究先从血清学方面对乙型脑炎病毒的免疫保护情况做出评估，又从分子生物学方面对可疑病例进行了该病毒的分离鉴定。自2008年5月份以来收集的河南省12个市的801猪血清，使用猪乙型脑炎病毒ELISA抗体检测试剂盒检测猪的JEVIgG抗体，以分析河南省猪群对乙型脑炎病毒免疫保护情况。在此期间，对全省各地区疑似乙型脑炎的发病猪场共收集病料22份，用细胞培养的方法分离病毒，对新分离的病毒进行RT-PCR鉴定。结果如下： 1.①2008～2009河南省全省乙型脑炎抗血清体阳性率为47.94％。部分地区抗体阳性率仅为10.00％，普遍较低下，有些地区更是处于高危发区。②从各季节对比看，5、6月份乙型脑炎抗体阳性率较低，不足40％，8月份血清抗体阳性率最高，达到55.99％，7月份紧随其后，达到47.50％，这可能是猪场普遍在夏初采取免疫的结果。⑨从全省各年龄阶段的猪乙型脑炎血清抗体检测结果发现母猪的血清抗体阳性率达到78.67％，公猪的血清抗体阳性率达到75.00％，而哺乳、保育、育肥仔猪的血清抗体阳性率较低，从这可以看出公、母猪阳性率高主要是由于多次免疫的结果，免疫的保护率与疫苗质量、猪体带毒相互交叉感染和技术员操作有关。而哺乳、保育、育肥仔猪的阳性率低，可能的原因是仔猪机体抵抗力差，或者滥用药物，导致部分仔猪感染了乙型脑炎病毒，造成免疫失败或免疫抑制。因此，为保证人类的安全，养猪业的健康发展，除了加强对成年猪的免疫外，重点要对仔猪的预防保护，防止猪乙型脑炎病的发生与流行。 2.从收集的22份病料中，成功分离到1株病毒，命名为HeN1株。该病毒可致PK-15细胞产生细胞病变（CPE），产生病变的时间为2～4d。为了更进一步分析该毒株，我们设计了1对引物，利用RT-PCR技术检测乙型脑炎病毒（JEV）。结果扩增出目的条带，从GenBank中查出收录的12株乙型脑炎病毒E基因的已知序列，用DNAstar软件对这13株JEV的E基因进行同源性分析，结果表明，新分离的JEVHeN1株与从GenBank上下载的JEV毒株序列同源性最高的为96.6％，进化树分析表明，新分离毒株与其他毒株不在同一个分支上，这可能与该病毒存在一定变异有关。

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致谢

文献综述

1.乙型脑炎病毒的病原学特性

1.1 乙型脑炎病毒的培养特性

1.2.乙型脑炎病毒的分子生物学特性

1.3 乙型脑炎的致病机制

2.乙型脑炎病毒的流行概况

2.1 传染源及传播媒介

2.2 流行情况

3.乙型脑炎危害

4.乙型脑炎病毒的诊断方法

4.1.JEV病毒的分离鉴定

4.2.JEV病毒的血清学诊断方法

4.3乙型脑炎病毒的分子生物学诊断方法

5.乙型脑炎的防治

6.本研究的目的与意义

引言

试验一 河南省猪乙型脑炎病毒血清流行病学调查

1.材料与方法

2.结果与分析

3.小结与讨论

试验二 乙型脑炎病毒的分离鉴定

1.材料与方法

2.结果与分析

3.小结与讨论

全文总结

参考文献