NHEs基因在LPS致小鼠腹泻肠管中的表达

摘要

钠/氢交换泵NHEs是存在于真核细胞中的一种重要离子跨膜转运载体，该蛋白载体有多种功能，主要功能有调节细胞内pH、控制细胞体积大小、负责钠/氢离子的转运、调节细胞周期及细胞增殖等多种功能。NHEs活性改变会引起机体Na+吸收障碍，导致腹泻，调节NHEs活性将是预防和治疗腹泻的一个新方向。目前关于NHEs基因与肠管分泌性腹泻的研究尚少，本文在前人研究的基础上利用LPS建立动物急性腹泻模型，通过动物精神状态、粪便排放、肠管蠕动和组织形态学变化来判定模型的建立;利用分子生物学的方法（qRT-PCR）对动物不同肠管NHEs基因进行定量检测，并分析模型组和对照组肠管NHEs基因的差异表达。结果如下:
　　LPS注射后1h和8h组均出现不同程度的腹泻，精神萎靡，采食量有所下降，与对照组形成明显差别;摄像观察发现:试验组小鼠肠管运动较剧烈，肠系膜静脉充血，肠壁明显水肿，随着注射时间的延长，水肿现象更为严重，肠系膜静脉血管，呈紫黑色;组织学观察结果显示，LPS注射1h后，黏膜及绒毛排列轻度紊乱，绒毛缩短，无黏膜变性、坏死，出现上皮细胞下间隙增大，肠腺轻度受损，毛细血管充血;注射后8h，小肠绒毛明显水肿，绒毛排列紊乱，绒毛黏膜糜烂脱落，肠腺受损，毛细血管发生明显充血，有炎症细胞浸润;提示LPS成功地诱导小鼠发生了腹泻。
　　qRT-PCR对NHEs基因进行定量检测结果发现:小鼠十二指肠、空肠、回肠、结肠均有NHE2、NHE3、NHE8基因的表达;NHE2基因表达水平高低:空肠＞十二指肠=结肠＞回肠;NHE3基因表达水平高低:结肠＞十二指肠=空肠＞回肠;NHE8基因在各肠管表达一致;LPS注射1h后上调十二指肠NHE2基因表达，8h下调其表达;LPS能下调回肠、结肠NHE2基因表达，上调空肠NHE2基因表达，且依赖作用时间;LPS均上调十二指肠、空肠、回肠和结肠NHE3基因表达，且依赖作用时间，8h均达到差异极显著水平;LPS注射1h后上调十二指肠NHE8基因表达，8h下调其表达; LPS上调空肠、回肠NHE8基因表达，下调结肠NHE8基因表达，且依赖作用时间。
　　依据以上结果提示，LPS诱导腹泻的发生与肠管NHEs基因转录水平的变化密切相关，且NHEs各亚型在不同肠管发挥的作用也不同。

目录

声明

致谢

摘要

1 文献综述

1．1 腹泻的危害

1．2 腹泻的病因

1．2．1 腹泻的类型

1．2．2 肠道的微生态

1．2．3 腹泻的原因和机制

1．2．4 腹泻和NHEs的关系

1．3 NHE基因的研究

1．3．1 NHE结构和组织分布

1．3．2 NHE2、NHE3、NHE8基因启动子的特点

1．4 LPS引起小鼠的腹泻

1．5 展望

2 引言

3 材料与方法

3．1 试验动物与分组

3．2 肠道组织样品的采集

3．3 指标测定

3．3．1 肠道组织形态学变化

3．3．2 肠管NHEs基因的表达

3．4 仪器及试剂

3．4．1 主要试剂

3．4．2 主要仪器设备

3．5 试验方法

3．5．1 肠道组织石蜡切片制作

3．5．2 肠管NHEs基因的表达

4 结果与分析

4．1 小鼠的活动特征

4．2 小鼠肠管蠕动情况

4．3 小鼠肠管组织形态学变化

4．4 NHEs基因在小鼠肠管中的差异表达

4．4．1 总RNA的检测结果

4．4．2 NHEs的荧光定量PCR检测结果

4．4．3 NHEs基因在各肠管中的转录水平

4．4．4 LPS对小鼠肠管NHEs基因表达的影响

5 讨论与结论

5．1 讨论

5．1．1 腹泻模型的建立

5．1．2 NHEs组织分布

5．1．3 NHE2与腹泻

5．1．4 NHE3与腹泻

5．1．5 NHE8与腹泻

5．2 结论

参考文献