益生菌的制备及其对固始鸡生产性能、免疫性能和肠道微生态的影响

摘要

本研究旨在从健康家禽肠道中分离筛选出能耐受胃肠道低pH和高浓度胆盐环境及具有抗菌活性的唾液乳酸杆菌和蜡样芽孢杆菌，并与实验室保存的酿酒酵母菌按7∶2∶1（唾液乳酸杆菌9×108/g，蜡样芽孢杆菌2.5×108/g，酿酒酵母菌1.5×108/g）的比例复合后，按10％的接种量在30℃条件下72h发酵豆粕（豆粕∶麸皮=7∶3），并监测发酵过程中的一些常规指标的变化。继而用益生菌发酵豆粕和生豆粕制备的基础日粮分别饲养1日龄的固始鸡（公鸡），饲养期为28天，随后比较测定发酵豆粕对固始鸡生长、免疫、肠道微生态及肠道形态的影响。
　　试验一耐酸耐胆盐及具有抗菌活性的唾液乳酸杆菌和蜡样芽孢杆菌的分离鉴定
　　从健康家禽肠道中分离出具有产酸能力的乳酸杆菌和耐高温的芽孢杆菌，分别经过耐酸耐胆盐的初筛和复筛及乳酸菌抗菌活性的测定，得到对胃肠道环境具有较强耐受力的芽孢杆菌及耐酸耐胆盐且具有抗菌活性的乳酸杆菌。对筛选出的菌种进行16S rRNA序列鉴定，用MEGA5.0对鉴定出的菌株进行进化树的构建及分析。成功筛选出符合试验要求的唾液乳酸杆(Lactobacillus salivarius)和蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。
　　试验二益生菌发酵豆粕过程中常规营养指标的动态监测
　　用麦氏比浊仪分别对培养的唾液乳酸杆菌悬液、蜡样芽孢杆菌悬液和酿酒酵母菌悬液进行菌液浓度调整，按10％接种量以7∶2∶1（唾液乳酸杆菌9×108/g，蜡样芽孢杆菌2.5×108/g，酿酒酵母菌1.5×108/g）的比例添加到基础豆粕（豆粕∶麸皮=7∶3）中，在温度为30℃、湿度为70％-90％的环境中发酵72h，每隔12h于无菌环境中采样并通风换气，以检测发酵过程中一些常规指标的变化情况。结果表明:1）水分含量在整个发酵过程中基本维持在37％左右，无显著变化;2）蛋白质含量在整个发酵过程中的变化为先降低后显著升高(P＜0.05)的趋势，随后维持在相对较高的状态;3）pH值在发酵36h后显著降低(P＜0.05)，随后都稳定在低pH范围内;4）活菌含量先显著降低(P＜0.05)，36h显著升高(P＜0.05)后一直维持较高的活菌量。5）除苏氨酸外，各种氨基酸含量均呈现上升趋势，且到发酵72h时，各氨基酸含量均显著性提高(P＜0.05)。
　　试验三发酵豆粕对固始鸡生长、免疫、肠道微生态及肠道形态的影响
　　本试验选用1日龄固始鸡作为试验动物，共96只，分为2个处理，每个处理4个重复，分别用益生菌发酵豆粕和生豆粕制成的基础日粮饲喂，在实验的第1d、14d、28d测其生长性能后，每个处理随机取4只鸡放血致死，测其免疫器官指数，无菌分离各肠段并采集其内容物。结果表明:1）益生菌发酵豆粕显著提高了整个饲养期的平均日增重(p＜0.05);2)益生菌发酵豆粕对整个饲养期胸腺指数都有显著提高(p＜0.05)，对饲养末期法氏囊指数也有显著提高(p＜0.05);3)益生菌发酵豆粕对14d十二指肠重量，28d回肠重量和28d空肠长度都有显著提高(p＜0.05);4)益生菌发酵豆粕显著增加了14d回肠、28d直肠乳酸菌数量(p＜0.05)，显著降低了14d、28d盲肠大肠杆菌和28d盲肠沙门氏菌数量(p＜0.05);随着日龄的增长，十二指肠、空肠、回肠的微生物区系趋于平衡，且后期微生物种类逐渐增多，而盲肠和直肠后期微生态的多样性优于前期;回收条带以假单杆菌、芽孢杆菌和乳酸菌较多;5）益生菌发酵豆粕显著增加(p＜0.05)了28d固始鸡十二指肠、直肠的绒毛高度。实验结果表明，益生菌发酵豆粕能够促进固始鸡的生长，提高免疫器官指数，对肠道发育也有不同程度的促进作用，能够促进小肠微生物区系的平衡和大肠微生物的多样性，一定程度促进了肠道绒毛的发育。

目录

声明

致谢

论文说明

摘要

1 文献综述

1．1 益生菌概述及其研究现状

1．2 益生菌应具备的条件

1．2．1 菌种安全性及稳定性

1．2．2 菌种宿主来源及其粘附、定植

1．2．3 菌种在胃肠道环境中的耐受性

1．3 常用益生菌的种类及作用机制

1．3．1 饲用乳酸杆菌制剂的研究

1．3．2 饲用芽孢杆菌制剂的研究

1．3．3 饲甩酵母菌制剂的研究

1．4 益生菌发酵豆粕的研究

1．5 发酵豆粕在动物生产上的应用

1．5．1 发酵豆粕对动物生长性能研究的影响

1．5．2 发酵豆粕对动物免疫功能的影响

1．5．3 发酵豆粕对动物肠道微生物区系平衡的调控

1．5．4 发酵豆粕对动物肠道形态影响的研究

2 引言

3 试验内容

试验一 耐胃肠道环境乳酸杆菌和芽孢杆菌的分离鉴定

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

1．3 数据处理

2 结果与分析

2．1 细菌筛选结果

2．2 筛选菌株的耐梯度酸和胆盐特性

2．3 优势菌株生长曲线测定结果

2．4 优势乳酸杆菌菌株L2、L4、L10产酸曲线测定结果

2．5 L2、L4、L1 0菌株抑菌活性的测定

2．6 16SrRNA基因扩增、预测与构建系统进化树

3 讨论

试验二 复合益生菌发酵豆粕过程中常规营养指标监测

1 材料和方法

1．1 菌种

1．2 发酵条件

1．3 测定指标及方法

2 结果与分析

3 讨论

试验三 益生菌发酵豆粕对固始鸡生产、免疫及肠道微生态的影响

1 材料和方法

1．1 试验动物与分组

1．2 试验饲粮和营养水平

1．3 饲养管理

1．4 测定指标和方法

1．5 数据统计与分析

2 结果与分析

2．1 益生菌发酵豆粕对固始鸡生长性能的影响

2．2 益生菌发酵豆粕对固始鸡免疫器官发育及血清免疫球蛋白的影响

2．3 益生菌发酵豆粕对固始鸡肠道发育的影响

2．4 益生菌发酵豆粕对固始鸡肠道主要菌群的影响

2．5 益生菌发酵豆粕对固始鸡肠道微生物区系的影响

2．6 益生菌发酵豆粕对固始鸡肠道形态的影响

3 结论与讨论

3．1 益生菌发酵豆粕对固始鸡生长性能的影响

3．2 益生菌发酵豆粕对固始鸡免疫器官发育及血清免疫球蛋白的影响

3．3 益生菌发酵豆粕对固始鸡肠道发育及肠道形态的影响

3．4 益生菌发酵豆粕对固始鸡肠道微生物区系的影响

结论

参考文献