Ska2在进展期贲门粘液腺癌与非粘液腺癌中的表达及临床意义

摘要

目的：
　　粘液腺癌是贲门癌较为少见的一种病理类型肿瘤，而Ska2与恶性肿瘤形成、侵袭性有着密切关系。本研究分别对进展期贲门粘液腺癌和非粘液腺癌中Ska2表达情况进行检测，以期找到在进展期贲门癌不同病理类型Ska2表达差异及其与临床病理特征的关系，为临床诊疗及科研提供数据支持。
　　方法：
　　回顾性研究安阳市肿瘤医院2013-2016年期间经术后病理证实为粘液腺癌和非粘液腺癌各40例。其中粘液腺癌组中男性30例，女性10例，年龄52～84岁，中位年龄61岁，平均年龄60岁。非粘液腺癌组中男性31例，女性9例，年龄39～82岁，中位年龄59岁，平均年龄58岁。根据2010年国际抗癌联盟/美国癌症联合委员会（ UICC/AJCC）分期原则，本研究纳入粘液腺癌：I期3例，II期16例，III期21例；T26例，T330例，T44例；N010例，N19例，N213例，N38例。非粘液腺癌：I期2例，II期14例，III期24例；T23例，T334例，T43例；N05例，N110例，N213例，N312例。另选取10例睾丸精原细胞瘤标本作为免疫组化的阳性对照。Ska2在 mRNA和蛋白水平上的表达分别采用实时荧光定量RT-PCR和Western blot、免疫组化的方法进行检测。应用SPASS22.0统计软件，分析贲门粘液腺癌与非粘液腺癌Ska2的表达情况及与临床病理类型之间的关系。
　　结果：
　　1.免疫组化的结果通过纳入的标本行进免疫组化检测分析，我们发现 Ska2蛋白在粘液腺癌中阳性表达高达90％，而在非粘液腺癌中表达仅为42.5%，对比发现粘液腺癌组 Ska2蛋白的表达明显高于非粘液腺癌组，统计分析提示有统计学差异（p=0.002）。我们进一步针对粘液腺癌与非粘液腺癌的相关临床、病理特征进一步分析发现 Ska2在两组表达情况与年龄、Lauren分型、神经侵犯、脉管癌栓、ki-67阳性、T分期、N分期、TNM分期无明显统计学差异（p＞0.05）。
　　2.Western blot实验结果凝胶成像系统显示目的蛋白Ska2大小约为14 kDa，同时以蛋白大小为36 kDa的甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH）作为内参。应用灰度分析软件（ImageJ软件）对目的蛋白（Ska2）条带进行灰度分析，用与 GAPDH灰度值的比值表示。Western blot结果显示目的蛋白在贲门粘液腺癌中表达量较非粘液腺癌高（p=0.01），此方法结果与免疫组化所得出的结果相一致。
　　3.RT-PCR检测结果采用荧光定量RT-PCR法检测Ska2 mRNA在贲门粘液腺癌与非粘液腺癌。其中选择的内参对照组为 GAPDH。结果显示Ska2基因扩增水平在粘液腺癌与非粘液腺癌两组中无明显统计学差异（p＞0.05）。
　　结论：
　　Ska2基因表达在贲门粘液腺癌与非粘液腺癌中可能存在差异，并且前者较后者表达更高，但 Ska2过度表达在贲门癌中与肿瘤侵袭性关系可能不大，但需要进一步扩大样本证实。

目录

声明

第1章 绪论

1.1研究背景

1.1.1 贲门癌流行病学情况

1.1.2 贲门癌治疗现状

1.1.3 肿瘤发生机制及靶向药物研究

1.2研究目的

1.3研究意义

第2章 材料与方法

2.1临床病理资料

2.1.1 资料来源

2.1.2 一般临床资料

2.1.3 临床分期标准

2.1.4 贲门癌大体类型分型标准

2.2实验材料

2.2.1RT-PCR、Western-blot实验材料

2.1.2免疫组化实验材料

2.3实验步骤

2.3.1 RT-PCR实验

2.3.2 Western-blot实验

2.3.3免疫组化法

2.4病理组织分级

2.5数据统计

第3章 实验结果

3.1贲门粘液腺癌与非粘液腺癌免疫组化结果

3.1.1 免疫组化结果

3.1.2贲门粘液腺癌与非粘液腺癌Ska2表达水平

3.1.3贲门粘液腺癌与非粘液腺癌Ska2表达与临床特征关系

3.2 贲门粘液腺癌与非粘液腺癌Western-Blot实验结果

3.3 贲门粘液腺癌与非粘液腺癌PCR实验结果

第4章 讨论

第5章 结论

参考文献

缩略语词汇表

致谢

攻读学位期间的研究成果