Toll样受体2及4在血清阴性脊柱关节病患者外周血单核细胞的表达及其意义

摘要

背景：血清阴性脊柱关节病（Seronegative Spondyloarthropathy, SpA）是一组具有共同特征的相互关联的侵犯脊柱、外周关节和关节周围组织的多系统炎性疾病的总称。其病因不明，一般认为与遗传和环境因素有关。其中细菌感染在SpA的发生及复发中起着重要的作用。Toll样受体（Toll-like receptors, TLRs）作为一种模式识别受体，在抗感染免疫中首先被人们认识，TLRs激活后引发细胞的信号转导最终导致炎性介质的释放，启动炎症和适应性免疫应答。目前的研究认为TLRs信号通路参与慢性免疫性炎性关节炎的发生、发展，对TLRs的深入研究将有助于SpA发病机制的了解，并为治疗提供新的思路。
　　目的：检测TLR2和TLR4在SpA患者外周血CD14+单核细胞表面的表达变化；探讨TLR2和TLR4表达水平与SpA患者病情活动性的关系；检测SpA患者血清高迁移率族蛋白-1（high mobility group box chromodomal protein1, HMGB1）、血清白介素-6（Interleukin-6,IL-6）、肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）与健康对照的差异；分析SpA患者血清HMGB1浓度与TLR2、TLR4表达水平及炎症指标的关系。
　　方法：根据有关标准选择SpA患者71例及健康人30例作为研究对象。应用流式细胞术分别检测CD14+单核细胞表面TLR2和TLR4阳性细胞的表达水平并进行比较。应用双抗体夹心固相酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清HMGB1、IL-6、TNF-α的浓度水平，收集患者临床资料并计算SpA患者bath疾病活动指数（Bath Ankylosing Spondylitis Disease Activity Index, BASDAI）评分。根据BASDAI评分将SpA患者组分为活动组54例（BASDAI评分＞4）和非活动组17例（BASDAI评分≤4），分别比较正常对照组、活动组和非活动组三组间TLR2、TLR4表达水平的差异以及血清HMGB1、IL-6、TNF-α浓度水平的不同。最后将TLR2、TLR4表达水平分别与IL-6、TNF-α、HMGB1的浓度水平及血沉（ESR）、C反应蛋白（CRP）、免疫球蛋白（Ig）和BASDAI评分等临床资料进行相关性分析。
　　结果：
　　1. SpA患者外周血CD14+单核细胞中TLR2+细胞所占比例为86.7±14.6（％）与正常对照组82.82±8.60（%）差异无统计学意义（P=0.729）；TLR2+细胞的平均荧光强度（mean fluorescence intensity, MFI）为143.4±91.7与正常对照组116.8±86.1，统计学尚无差异（P=0.870）。TLR4+细胞所占比例为39.4±10.1（%），高于正常对照组22.3±7.5（%）差异有统计学意义（P<0.001）；TLR4+细胞的MFI为33.2±15.9，正常对照组28.3±11.6差异无统计学意义（P=0.245）。
　　2.将患者组依BASDAI分为活动组与非活动组，其中TLR2+细胞的比例在活动、非活动及正常对照组的各组间差异无统计学意义（均P＞0.05）。TLR2+细胞的MFI在各组间差异无统计学意义（均P＞0.05）。TLR4+细胞的比例在非活动组和活动组（32.9±11.4,42.5±16.1）与正常组相比(22.3±8.0)有显著性差异(P<0.001)，活动组和非活动组之间相比有显著性差异（P<0.001）。TLR4+细胞的MFI在各组间差异无统计学意义（均P＞0.05）。
　　3. SpA患者血清HMGB1、IL-6、TNF-α浓度水平在SpA患者非活动组和活动组分别为[11.9±5.5(ng/ml),5.74±2.4(pg/ml),36.5±10.3(pg/ml);15.7±6.8(ng/ml),8.36±4.1(pg/ml),64.2±16.1(pg/ml)]与正常组相比[7.2±4.8(ng/ml);10.8±8.0(pg/ml);2.87±1.1(pg/ml)]均有显著性差异(P<0.001)，活动组和非活动组之间相比亦均有显著性差异（P<0.001）。
　　4.患者血清HMGB1浓度水平与患者血清IL-6浓度水平成正相关(r=0.511， P=0.000)；患者血清HMGB1浓度水平与患者血清TNF-α浓度水平成正相关(r=0.481, P=0.000)。
　　5. TLR2表达与临床资料及细胞因子的相关性：TLR2＋细胞的比例与患者ESR呈正相关（r=0.296，P=0.017）与血清IgG定量呈正相关（r=0.357，P=0.011）。TLR2+细胞的MFI与患者ESR呈正相关（r=0.361，P=0.04）；与血清IgA定量呈正相关（r=0.327，P=0.023）；与血清IgG定量呈正相关（r=0.285，P=0.049）。
　　6. TLR4表达与临床资料及细胞因子的相关性：TLR4+细胞的比例与血清HMGB1浓度水平成正相关(r=0.284,P=0.020)；与患者血清IL-6浓度水平成正相关(r=0.451， P=0.000)；与患者血清TNF-α浓度水平成正相关，(r=0.342，P=0.004)；TLR4+细胞的比例与患者ESR呈正相关（r=0.299，P=0.016）；与血清IgA定量呈正相关（r=0.355，P=0.011）；与BASDAI呈正相关（r=0.325，P=0.007）。
　　结论：
　　1. SpA患者外周血单核细胞表面TLR4表达升高，与正常对照组相比有显著性差异。提示TLR4与SpA发病有关。
　　2. TLR4表达水平与ESR和IgA呈正相关，TLR4表达水平与BASDAI呈正相关。TLR2表达水平与ESR和IgG呈正相关；提示SpA患者外周血单核细胞TLR2、TLR4表达水平可作为判断SpA患者疾病活动度的参考指标。
　　3. SpA患者血清HMGB1明显升高且与IL-6、TNF-α呈正相关，提示HMGB1与SpA疾病活动有关。
　　4. SpA患者血清HMGB1浓度水平与TLR4正相关，但与TLR2不相关，提示升高的血清HMGB1浓度水平通过激活TLR4的NF-?B途径参与病情活动。

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中文摘要

英文摘要

前言

材 料 与 方 法

1、实验材料

2、实验方法

3 统计处理

结果

1 TLR2及TLR4在单核细胞表面的表达

2 TLR2及TLR4的表达与临床指标的相关性

讨论

1．细菌与SpA

2、TLRs—感染与免疫之间的桥梁

3、TLRs与SpA

4 细胞因子与SpA

结论

参考文献

致谢

附录A英中文术语缩略语对照表

附录B 1991年ESSG脊柱关节病的分类标准

附录C常用试剂配制

附录D 综述: Toll样受体与脊柱关节病