转录因子Sp1对肺腺癌细胞A549中生存素的转录调控

摘要

目的:探讨转录因子-特异性蛋白1(specificity protein1,Sp1)在肺腺癌细胞A549中对生存素（survivin）转录调控的作用。
　　方法:1.免疫组化SP法检测120例非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者和40例良性肺疾病患者手术标本中survivin和Sp1蛋白的表达情况，并分析两者表达的相关性。2.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测人肺腺癌细胞株-A549细胞中survivin和Sp1 mRNA的表达。3.在本室构建好的含survivin核心启动子的荧光报告载体上,基因定点突变survivin核心启动子上经电泳迁移率变动分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)证实存在的-121bp~-116bp处的Sp1结合位点，并转染至A549细胞中,测定萤光素酶的表达活性，比较survivin核心启动子片段及其突变体在A549细胞中的表达活性差异。4.化学合成法构建靶向Sp1基因的RNA小干扰片段(small interference RNA,siRNA),脂质体介导转染至A549细胞,荧光定量RT-PCR及Western-blot法检测Sp1及survivin mRNA和蛋白表达。
　　结果:1.NSCLC组织中survivin和Sp1的阳性表达率分别为81.6％(98／120)和62.5％(75／120);良性肺疾病组织中两者阳性表达率分别为0和7.5%(3／40),二者表达呈正相关(rs'=0.214, P<0．05)。2. A549细胞中survivin和Sp1 mRNA均表达。3.含有survivin核心启动子（pGL3-SVP230-luc）及其突变体（pGL3-SVP231-luc）的萤光报告载体在 A549细胞中的活性，均高于阳性对照组 pGL3-control和阴性对照组 pGL3-basic(p<0.05)。在 A549细胞中， pGL3-SVP230-luc的相对活性为40.99;高于pGL3-SVP231-luc的25.94(p<0.05)。4.通过RNAi下调Sp1的表达,能降低A549细胞中survivin mRNA和蛋白的表达。
　　结论:1.非小细胞肺癌组织中survivin蛋白和Sp1蛋白均高表达且二者表达呈正相关。2.A549细胞内survivin和Sp1mRNA均高表达。3.survivin启动子上的Sp1结合位点-121bp~-116bp对其活性具有正性作用。4.靶向Sp1的siRNA,可下调survivin mRNA和蛋白表达。

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中文摘要

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前言

材料与方法

1.材料

2.方法

结果

1.Survivin 和 Sp1 蛋白在非小细胞肺癌组织中均有高表达，且两者表达呈正相关

2.A549细胞中survivn与Sp1 mRNA均有表达

3.survivin启动子在5’端上游-121bp~-116bp处潜在Sp1结合位点突变前后转录活性分析

4. 靶向Sp1的siRNA对Sp1及survivin表达的影响：

讨论

结论

参考文献

致谢

附录A英 文 缩 略 语

附录B部 分 主 要 试 剂 配 制 方 法

附录C在校期间发表的文章

附录D 综述: Survivin与Sp1关系研究进展