孕妇外周血血浆中胎儿游离DNA对预测胎儿血型的研究

摘要

背景:新生儿溶血病(Hemolytic Disease of the Newborn，HDN)是由于胎儿与母亲红细胞血型不合引起的免疫性溶血性疾病。文献报告引起HDN的红细胞血型有ABO血型系统、Rh血型系统、MN与Ss血型系统、Kell血型系统、Kidd血型系统、Yt血型系统、Duffy系统血型、Diego血型系统等。但是，临床上最常见的是胎儿与母亲的ABO血型与RhD血型不合引起的HDN。在新生儿溶血病中，母体内IgG类血型抗体可通过胎盘进入胎儿血液循环，与胎儿红细胞表面相应血型抗原结合，造成胎儿红细胞的免疫性破坏。产前检测胎儿的ABO和RhD血型，可以预测HDN的发病率，在临床上意义重大。在胎儿出生前检测胎儿的方法有两种，包括侵入性和非侵入性的。侵入性的产前检测方法，如羊水细胞离心法、胎盘组织活检、脐穿刺、绒膜绒毛取样和羊膜穿刺术，可以给孕妇和胎儿带来风险，如发生胎盘出血和自发性流产等，临床应用比较慎重。在那些非侵入性的检测方法中，主要是通过流式细胞术分离胎儿细胞，然后再进行各项检测。然而，这种方法对操作人员的技术要求较高，且需要一些昂贵的仪器设备。
　　 1997年，Lo等研究发现，孕妇外周血血浆中含有胎儿的游离DNA。这种DNA有三种最为可能的来源：胎儿造血细胞、胎盘、胎儿和孕妇之间DNA分子的直接转运。胎儿的游离DNA浓度还与孕龄有关，在孕期的第四周就能检测到这种DNA，而且其浓度会随着孕龄的增加而升高，并在孕期的最后八周内达到顶峰。此外，除了孕妇外周血中胎儿DNA的浓度在整个孕期会发生规律性的变化外，在胎儿处于某些疾病状态的时候，与正常水平相比，这种DNA浓度会出现显著增加，临床上可以将胎儿游离DNA应用于某些胎儿遗传性疾病的产前诊断。本研究根据人类ABO血型和RhD血型的分子基础，利用孕妇外周血血浆中胎儿游离DNA来产前预测胎儿的ABO和RhD血型，是一种新的、非侵入性的检测方法，避免了对孕妇创伤和导致胎儿自发流产的风险。
　　 目的:利用孕妇外周血血浆中的胎儿游离DNA来产前检测胎儿ABO及RhD血型，预防新生儿溶血病。
　　 方法:(1)随机收集90例O型孕妇的外周血及配偶血样，采用血型血清学方法鉴定夫妻双方的ABO血型，2-巯基乙醇中和IgM抗-A、抗-B后，倍比稀释法检测孕妇外周血中IgG抗-A和抗-B效价。提取胎儿游离DNA，通过检测SRY基因来验证胎儿游离DNA是否存在，选择SRY基因阳性样本，使用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法来产前检测胎儿ABO血型的基因型，用血型血清学方法检测胎儿出生后的ABO血型，并与产前运用DNA预测的结果比较。(2)收集有既往妊娠史的RhD阴性孕妇外周血80例及配偶血样，血型血清学方法鉴定夫妻双方的RhD血型，采用间接抗球蛋白法和吸收放散实验来检测RhD阴性孕妇红细胞上的的D抗原，提取DNA，通过检测SRY基因来验证胎儿游离DNA是否存在，选择SRY基因阳性样本，运用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术来检测胎儿的RhD血型，用血型血清学方法检测胎儿出生后的RhD血型，并与产前运用DNA预测的结果进行比较。
　　 结果:在90例O型孕妇外周血血浆样本中，SRY基因阳性率为52.22％(47/90例)；80例RhD孕妇外周血血浆样本中，SRY基因阳性率为52.50％(42/80例)。将产前运用DNA预测的胎儿血型与胎儿出生后的血清学方法鉴定的血型相比较，各种血型的符合率差异明显。在ABO血型中，A型的符合率为84.21％(16/19例)，B型的符合率为81.25％(13/16例)，0型的符合率为75.00％(9/12例)；在RhD血型中，RhD阳性符合率为89.29％(25/28例)，RhD阴性符合率为78.57％(11/14例)。
　　 结论:孕妇外周血血浆中含有胎儿的游离DNA，将这种DNA用于产前预测胎儿的ABO血型和RhD血型是切实可行的。