茜草有效部位体内分布及有效成分对CYP2E1影响的研究

摘要

本论文共由四章组成,第一章对茜草石油醚部位进行血清药物化学研究,分析了茜草石油醚部位中有效成分在家兔体内的吸收和代谢情况。第二章采用 HPLC的方法对RMC在大鼠体内的代谢情况分析研究。第三章用探针药物法对RMC在体外对大鼠肝微粒体CYP2E1酶活性的影响进行研究。第四章对天然产物对细胞色素P450酶活性影响研究的进展进行了综述。
　　第一章茜草石油醚部位血清药物化学研究
　　健康家兔禁食12 h后以0.2 g·mL-1茜草石油醚部位制成的灌胃液灌胃,灌胃剂量为5 mL·100 g-1,在灌胃前和灌胃后15 min、30 min、60 min、90 min、120 min分别采血3 mL,血清预处理后过0.45μm滤膜,经HPLC分析,采用Purospher STAR RP-18柱(4.6 mm×250 mm,5μm,Merk);流动相为甲醇-水-四氢呋喃(90:9.3:0.7);体积流量1.0 mL·min-1;检测波长为250 nm;柱温25℃;进样量10μL。经分析,15 min时RMC已吸收入血,30 min时已代谢,90 min时可能有其他物质代谢生成RMC,120 min代谢完毕。
　　第二章 RMC在大鼠体内代谢研究
　　健康 SD大鼠禁食12 h后尾静脉注射1.75 mg·mL-1RMC溶液,注射剂量为0.2 mL·100g-1,分别在注射前和给药后5 min、15 min、30 min、45 min、60 min、90 min、120 min、180 min、240 min断尾取血,经血清预处理后过0.45μm滤膜,经HPLC分析,采用Purospher STAR RP-18柱(4.6 mm×250 mm,5μm,Merk);流动相为甲醇-水-四氢呋喃(90:9.3:0.7);体积流量1.0 mL·min-1;检测波长为250 nm;柱温25℃;进样量10μL。高效液相检测均没有在血清中检测到RMC,推测RMC吸收代谢迅速,5分钟时已经代谢完毕。
　　第三章 RMC对大鼠肝细胞CYP2E1酶活性影响研究
　　健康大鼠禁食12 h,处死后取出肝脏,冲洗干净后用超速离心法制备肝微粒体,用考马斯亮蓝测定所制备肝微粒体蛋白浓度后进行孵育。反应体系总体积为500μL,体系中分别含有肝微粒体80μL,5.0 mmol·L-1 MgCl2溶液,探针药物0.7 mg·mL-1对硝基苯酚溶液1μL,实验组加样品1mg·mL-1RMC10μL,空白组加等体积PBS缓冲液。混旋后放入37℃预孵育5 min,加入1 mmol·L-1NADPH启动反应。30 min、60 min后分别取出各实验组和空白组加入500μL冰冷的甲醇溶液终止反应,涡旋混匀,离心,取上清液过0.45μm滤头,取续滤液HPLC进样。采用Purospher STAR RP-18柱(4.6 mm×250 mm,5μm,Merk),流动相为1％醋酸乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氢钾缓冲液20:80;体积流量1.0 mL/min;检测波长为275 nm;柱温25℃;进样量10μL。结果显示,30分钟和60分钟空白组均有4-硝基儿茶酚生成,而两个实验组均没有检测到4-硝基儿茶酚,证明RMC为CYP2E1酶抑制剂。
　　第四章天然产物对细胞色素P450酶活性影响研究的进展
　　本章综述了天然产物对细胞色素P450酶活性影响的研究进展和研究方法。

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目录

第一章 茜草石油醚提取物血清药物化学研究

1 前言

2 实验方法

3讨论

4 结论

参考文献

第二章 RMC在大鼠体内吸收代谢研究

1 前言

2 实验方法

3讨论

4 结论

参考文献

第三章 RMC对大鼠肝细胞CYP2E1活性影响研究

1 前言

2 实验方法

3讨论

4 结论

参考文献

第四章 天然产物对细胞色素P450酶影响的研究进展

1细胞色素P450酶系

2 天然产物对细胞色素P450酶的影响

3 天然产物对细胞色素P450 酶影响的研究方法

4 结论

参考文献

结论

论文创新点

致谢