野马追的质量标准和野马追内酯A的制备工艺研究

摘要

野马追（Eupatorium LindLeyanum DC.）为菊科轮叶泽兰属植物，是江苏省盱眙地区的道地药材。在通常情况下，野马追是全草入药，具有清除体内热毒、化痰止咳、利尿消肿、降血压等功能。在临床上广泛用于治疗慢性气管炎、支气管炎等呼吸系统疾病和高血压。1979年，外国学者Kazuo[1]，从野马追药材中分离得到的野马追内酯(A，B，C，D)，通过药理学实验证明这四种内酯均具有抗人体鼻咽癌(KB)细胞的功效。目前对于野马追内酯的研究比较少，本文主要针对野马追内酯A展开实验，建立了野马追的质量标准，并确定了提取、分离和纯化野马追内酯A的最佳工艺。本文的研究成果如下:
　　一、建立了野马追药材的质量标准。通过研究野马追内酯A和野马追内酯B的薄层色谱TLC和高效液相HPLC行为，建立了一套简单易行、准确、快速、成本低的分析方法，为野马追的药材质量标准研究提供了实用可行的方案。基于此实验方案，我们分别对六批来自不同产地的野马追药材中内酯A和内酯B的含量进行了测定，从而为药材的质量评价提供了理论依据，同时也为后续提取分离野马追内酯A的工作提供了药材的选择依据和测定方法。
　　二、通过对有机溶剂回流提取工艺和超声提取工艺的评价研究，确定了最佳的野马追内酯A的提取方法，该法提取率高且成本低。通过有机溶剂回流法提取野马追内酯A，采用单因素实验，考察提取溶剂、提取时间、提取温度、料液比、提取次数这五个因子对内酯A收率的影响，以单因素实验为基础，建立正交实验，确定最佳提取方案:90％的甲醇-水混合溶剂，在料液比为1∶20的条件下，70℃C回流提取2.5h。采用单因素实验，考察提取溶剂、提取时间、料液比、提取次数这四个因素对内酯A收率的影响，建立正交表，得到超声提取的最佳条件:90％的甲醇-水混合溶剂，在料液比为1∶20的条件下超声提取两次，每次30min。通过这两种工艺的比较，超声提取明显比回流提取的效率高，而且性质稳定。
　　三、通过对野马追内酯A的分离纯化工艺研究，确定了最佳的分离纯化工艺。首先对野马追药材进行初步分离，分别用石油醚、乙酸乙酯萃取野马追浸膏水溶液，经HPLC分析，野马追内酯A主要集中在乙酸乙酯层。回收乙酸乙酯层，用硅胶柱色谱法对乙酸乙酯层划分粗段，经HPLC分析，野马追内酯A主要集中在乙酸乙酯部位的第8段，回收第8段，得浸膏，试验各种柱色谱对野马追内酯A的分离纯化效果。从生产成本和生产周期等方面考虑，确定了最佳的分离纯化工艺:首先用中压MCI柱色谱，将Fr.8用MCI材料拌样，以甲醇-水4∶6为洗脱溶剂，结合TLC法和HPLC法检测，回收并浓缩含有野马追内酯A的部分，然后将其用硅胶拌样，用氯仿-甲醇或者石油醚-丙酮为混合溶剂洗脱，纯化野马追样品，结合TLC和HPLC法，对相同组分进行分析和合并，得到初步提纯的样品。将初步提纯的样品用RP-C18材料拌样，上样于中压RP-C18柱，用甲醇-水4∶6混合溶剂洗脱，每500ml收集一瓶，结合TLC法和HPLC法，挑选出纯度高的样品，真空旋转蒸发，回收样品。当野马追内酯A在旋转瓶中形成白色沉淀析出时，利用结晶和重结晶法对样品进行高度纯化，可以得到纯度98％以上的白色针晶。

目录

声明

摘要

第一章 野马追的研究概况

一．野马追的形态学研究

二．野马追的生态学研究

三．野马追的化学成分研究

3．1 倍半萜内酯类

3．2 黄酮类

3．3 二萜类

3．4 三萜类

3．5 甾醇类和有机酸类

3．6 微量元素

3．7 其他类成分

四．野马追的药理活性研究

4．1 呼吸系统药理作用

4．2 抗菌、抗病毒、抗微生物作用

4．3 对心血管系统的影响

4．4 毒理作用

4．5 野马追单体化合物抗肿瘤、抗补体作用

4．6 其他作用

五．菊科植物中倍半萜内酯的研究

六．本课题研究的目的和意义

第二章 野马追的质量标准研究

一．野马追药材的鉴别

1．1 药材样品

1．2 药材性状

1．3 显微特征

二．野马追内酯A和B的定性鉴别

2．1 实验试剂及设备

2．2 样品溶液的配制

2．3 野马追内酯A和内酯B的TLC薄层层析

2．4 野马追内酯A和内酯B的RP-HPLC鉴定

2．5 样品含量测定

2．6 实验小结

第三章 野马追内酯A的制备工艺研究

一．野马追内酯A的提取工艺分析

1．1 实验材料

1．2 回流提取法

1．3 超声提取法

1．4 实验结果与讨论

二．野马追内酯A的分离和纯化

2．1 实验原料及处理方式

2．2 试剂及仪器

2．3 检测方法

2．4 实验方案的确定

2．5 野马追内酯A的初步分离

2．6 乙酸乙酯部位野马追内酯A的HPLC分析

2．7 野马追内酯A的中等分离纯化

2．8 中压RP-C18制备野马追内酯A

2．9 野马追内酯A的结构鉴定

2．10 实验小结

参考文献

附录A

致谢