硫化氢对肥胖小鼠肝脂质蓄积的影响

摘要

背景：硫化氢在肝脏的生理和病理生理方面有重要的作用，然而硫化氢对肝细胞脂质代谢的影响还不清楚。
　　目的：研究外源性硫化氢对肥胖小鼠肝脂质蓄积的影响。
　　方法：实验动物采用C57BL/6J小鼠，随机分为对照组、模型组、硫化氢干预组。对照组饲喂普通饲料，模型组和硫化氢干预组饲喂高脂饲料。从第13周开始，硫化氢干预组注射硫化氢供体硫氢化钠，剂量为50μmol·kg-1·d-1，模型组注射等量生理盐水，16周末实验结束处死动物。处死动物时称取小鼠肝脏、白色脂肪、棕色脂肪重量；检测血浆中ALT、AST含量；肝脏组织匀浆后取上清做生化检测，检测各组小鼠肝组织中甘油三酯、胆固醇含量以及氧化应激相关指标；肝脏石蜡切片做H&E染色观察肝组织一般形态；冷冻切片，油红染色观察肝组织脂质蓄积情况；肝脏新鲜冰冻组织提取 RNA，PCR检测小鼠肝脏中CPT-1、FAS的基因表达情况，并用ELISA法检测CPT-1、FAS的活性。Western Blotting检测小鼠肝脏中CBS、CSE、3-MST蛋白的变化。
　　结果：与对照组相比，模型组、硫化氢干预组小鼠体重明显增高。与模型组相比，硫化氢干预组小鼠体重降低，肝组织内甘油三酯、胆固醇含量明显下降；小鼠肝脏质量、白色脂肪质量、棕色脂肪质量以及肝脏指数、白色脂肪指数明显降低。对照组小鼠肝组织结构基本正常，HE染色结果显示，肝小叶结构正常，中央静脉和肝血窦清晰；模型组小鼠肝组织结构破坏，可见肝小叶不清，肝索紊乱，肝窦狭窄，肝细胞内有大量脂肪空泡；经硫化氢干预后，硫化氢干预组小鼠肝小叶结构仍保持基本正常，肝窦清晰，肝细胞内脂肪空泡明显减少。油红O染色后结果显示，高脂组小鼠肝细胞和细胞间隙有大量脂滴弥漫沉积，硫化氢干预组脂滴明显减少；与模型组相比，硫化氢干预组小鼠肝脏CPT-1表达及活性增高，FAS表达及活性降低；与对照组相比，模型组小鼠肝脏CBS、CSE蛋白表达增高，经硫化氢干预后，CBS、CSE蛋白表达降低。
　　结论：1.外源性硫化氢对高脂饮食诱导肥胖小鼠脂肪肝有治疗作用。
　　2.外源性硫化氢治疗高脂饮食诱导肥胖小鼠脂肪肝是通过调节CPT-1和FAS的表达及活性实现的。
　　3.外源性硫化氢治疗高脂饮食诱导肥胖小鼠脂肪肝与抗氧化活性增高有关。

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前 言

1 材料、试剂和仪器

1.1 实验动物

1.2 主要试剂

1.3 主要试剂配制

1.4 仪器

2 实验方法与步骤

2.1 动物饲养与分组

2.2 肝脏指数、白色脂肪指数、棕色脂肪指数的检测

2.3 血浆ALT、AST的测定

2.4 肝脏中甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）含量的测定（酶法）

2.5 石蜡组织切片HE染色制作

2.6 油红O染色

2.7 肝组织脂质过氧化产物与抗过氧化酶活性测定

2.8提取小鼠肝脏RNA、逆转录以及RT-PCR（Reverse transcripion PCR）

2.9 ELISA法测定小鼠肝脏中CPT-1、FAS活性

2.10 Western Blotting检测肝脏中CBS、CSE和3-MST蛋白的表达

2.11 统计学分析

3 结果

3.1 一般情况观察

3.2 小鼠体重变化

3.3 硫化氢干预对小鼠血浆转氨酶的影响

3.4 硫化氢干预对小鼠肝脏指数、白色脂肪指数、棕色脂肪指数的影响

3.5 硫化氢干预对小鼠肝组织甘油三酯、胆固醇含量的影响

3.6 硫化氢干预对小鼠肝脏结构的影响

3.7 硫化氢干预对小鼠肝细胞脂质蓄积的影响

3.8 硫化氢干预对小鼠肝脏CPT-1、FAS基因表达的影响

3.9 硫化氢干预对小鼠肝脏CPT-1、FAS活性的影响

3.10 硫化氢干预对小鼠肝脏抗氧化能力的影晌

3.11 硫化氢干预对小鼠肝脏CBS、CSE、3-MST蛋白表达的影晌

4 讨论

参考文献

文献综述:硫化氢在肝脏中的生化代谢

1.非酒精性脂肪肝的研究进展

2.肝脏中硫化氢的生化代谢

3.展望

参考文献

附录:英文缩略词（Abbreviations）

致谢

硕士期间发表的学术论文