14-去氧穿心莲内酯脂质体的研究

摘要

目的：
　　14-去氧穿心莲内酯是从中药穿心莲中提取分离的二萜内酯类化合物，是穿心莲有效成分之一，具有解热、抗炎、抗菌、抗癌、抗钩端螺旋体病、保肝作用、抗高血压等活性。本课题组前期研究发现14-去氧穿心莲内酯体内对小鼠 Lewis肺癌具有一定的抑制作用，但其难溶于水，生物利用度较低。
　　脂质体是将药物包封于类脂质双分子层中而形成的微型泡囊，具有可以保护被包载的药物，增加药物的稳定性，增加难溶性药物的溶解度，具有一定的靶向性及缓释性，细胞亲和性及组织相容性等特点。本论文拟制备14-去氧穿心莲内酯脂质体以期提高其水溶性，改善其生物利用度。
　　方法：
　　高效液相色谱法建立14-去氧穿心莲内酯含量测定方法；采用摇瓶法测定14-去氧穿心莲内酯油水分配系数；采用饱和法测定14-去氧穿心莲内酯在不同介质中的溶解度；采用薄膜分散法制备脂质体，单因素考察对包封率影响较大的因素为胆固醇与磷脂比，药物与磷脂比及薄膜制备温度，在此基础上结合星点设计-效应面法以包封率、载药量、粒径为评价指标对处方进行优化、验证；采用超滤法测定14-去氧穿心莲内酯脂质体包封率；以包封率、粒径、pH值为指标，初步考察14-去氧穿心莲内酯在4℃与25℃条件下存放于10 mL西林瓶中避光保存一个月内的稳定性；马尔文粒度仪测定粒径与Zeta电位；采用透射电镜对14-去氧穿心莲内酯脂质体进行形态表征；动态透析法对14-去氧穿心莲内酯脂质体在0.3％十二烷基硫酸钠中进行体外释放行为考察。
　　结果：
　　1、高效液相色谱法测定14-去氧穿心莲内酯含量色谱条件：检测波长：205 nm，流动相：乙腈:水=40:60(v/v)，流速：1 mL/min，柱温：室温，以14-去氧穿心莲内酯计理论塔板数不低于5000。
　　2、14-去氧穿心莲内酯极易溶解于氯仿，溶解于甲醇，略溶于乙醇、丙酮中，微溶于乙酸乙酯和乙腈，极微溶于0.3%十二烷基硫酸钠水溶液和0.45%十二烷基硫酸钠水溶液，几乎不溶或不溶于水和0.1%十二烷基硫酸钠水溶液；在pH值为3.00-8.33范围内其溶解度相对恒定，在强酸强碱条件下不稳定；其油水分配系数（LgP）为2.10。
　　3、优化得到的处方为：大豆磷脂150 mg，胆固醇48.1 mg，水化体积25 mL，制备温度39℃，14-去氧穿心莲内酯6.94 mg，制备得到的14-去氧穿心莲内酯脂质体的包封率为（78.21±2.50）%，载药量为（3.02±0.17）%，粒径大小为（174.3±3.44）nm，多相分散系数PDI为0.206，Zeta电位为-（37.4±1.56）mV，脂质体的pH值为6.22。14-去氧穿心莲内酯脂质体在4℃与25℃条件下放置一个月稳定性结果：在25℃条件下包封率从73.21%降低到58.26%，pH值从6.22降低到6.04，粒径从174.3 nm升高到190.3 nm；在4℃条件下包封率从73.21%降低到67.98%，pH值从6.22降低到6.19，粒径从174.3 nm升高到175.2 nm。透射电镜显示14-去氧穿心莲内酯脂质体外观呈球形或椭圆球形。14-去氧穿心莲内酯脂质体在24 h时累计释放率为74.29%，而14-去氧穿心莲内酯原料药在12h时的累计释放率已经达到95.78%。
　　结论：
　　本课题建立的14-去氧穿心莲内酯含量测定方法具有较好的专属性、回收率高、重现性与精密度良好。所采用的制备工艺简单，易于操作，重现性好，包封率高；在4℃条件下14-去氧穿心莲内酯脂质体比较稳定；14-去氧穿心莲内酯脂质体具有一定的缓释性。

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第一章 前言

1 14-去氧穿心莲内酯研究概况

1.1 药理作用

1.2 含量测定方法

1.3 制剂研究

2 脂质体研究概况

2.1 脂质体的类型

2.2脂质体的特点

2.3 脂质体制备方法

2.4 脂质体包封率的测定方法

2.5 粒径测定方法

2.6脂质体给药方式

2.7 国内外上市脂质体品种

3 选题背景

第二章 14-去氧穿心莲内酯理化性质及含量测定方法建立

1 实验材料

1.1 药品与试剂

1.2 实验仪器

2 实验方法与结果

2.1 14-去氧穿心莲内酯外观形态及熔程

2.2 14-去氧穿心莲内酯化学鉴别及薄层显色鉴别

2.3 14-去氧穿心莲内酯含量测定方法建立

2.4 14-去氧穿心莲内酯溶解度测定

2.5 14-去氧穿心莲内酯油水分配系数的测定

3 讨论

4 本章小结

第三章 14-去氧穿心莲内酯脂质体处方的优化

1 实验材料

1.1 药品与试剂

1.2 仪器

2 实验方法与结果

2.1 包封率与载药量的测定

2.2 制备方法筛选

2.3 单因素考察

3 星点设计与优化

3.1 实验设计

3.2 模型拟合方程[76]

3.3 效应面分析14-DA脂质体的处方工艺

3.4 优化处方的确定及工艺验证

4 讨论

4.1 脂质体包封率测定方法

4.2 影响脂质体包封率因素

4.3 脂质体处方工艺优化

5 本章小结

第四章 14-去氧穿心莲内酯脂质体体外评价

1 实验材料

1.1 药品与试剂

1.2 仪器

2 实验方法与结果

2.1脂质体普通外观形态观察

2.2 脂质体的包封率与载药量

2.3 脂质体的粒径分布

2.4 脂质体的Zeta电位

2.5 脂质体的形态

2.6 脂质体的pH值

2.7 稳定性初步考察

2.8 体外释放特性研究

3 讨论

4 本章小结

第五章 全文小结

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文及参与项目