英文缩略词表
前言
材料与方法
1.1主要材料试剂
1.2试剂配制
2.1 细胞培养实验
2.2 细胞中总RNA的提取及定量
2.3 反转录PCR合成cDNA第一链
2.3 感受态细胞的制备
2.4 构建PRL3真核过表达质粒和shRNA干扰质粒
2.5 重组蛋白GST-PRL3的原核表达与纯化
2.6 GST-PRL3 pull-down实验验证PRL3与β-Tubulin相互作用
2.7 免疫沉淀证明PRL3与β-Tubulin的相互作用
2.8 PRL3瞬时沉默和过表达细胞系构建
2.9 PRL3过表达和沉默慢病毒包装和感染胶质瘤细胞
2.10 mCherry-β3-Tubulin重组质粒构建和β3-Tubulin磷酸化突变体S172A、S172D和S172E的构建
2.11 β3-Tubulin的突变体与细胞微管的共定位分析
2.12 PRL3过表达和沉默对胶质瘤细胞侵袭和迁移能力的影响
实验结果
3.1 PRL3原核过表达与纯化和互作蛋白验证
3.2 PRL3真核过表达质粒pIRES2-EGFP-PRL3和PRL3 shRNA干扰质粒的克隆与构建
3.3 pIRES2-EGFP-PRL3和pGenesil-siPRL3干扰质粒的瞬时转染
3.4 慢病毒感染实验结果
3.5 Transwell实验和划痕愈合实验
3.6 β3-Tubulin基因克隆和磷酸化突变体的构建
3.7 mCherry-β3-Tubulin和mCherry-PRL3融合蛋白真核表达质粒构建
3.8 微管结构染色与共定位实验
3.9 统计与分析
结论
讨论
致谢
攻读硕士期间发表的论文
参考文献
综述:PRL3与肿瘤侵袭与转移