树突状细胞促进LAK细胞对小鼠卵巢癌抑制作用的实验研究

摘要

目的：本研究在体外利用小鼠卵巢癌OVHM肿瘤细胞抗原致敏小鼠树突状细胞，并与小鼠LAK细胞共培养，研究肿瘤抗原致敏的DC对LAK细胞体内外抗肿瘤作用的影响，为临床综合利用DC和LAK细胞治疗肿瘤提供实验依据。 方法： 1.取对数生长期的OVHM细胞制备肿瘤抗原。 2.DC的制备和鉴定：从小鼠腿骨中获得骨髓细胞，加入抗CD4、抗CD8a、抗B220、抗Ter119和抗CD11b单克隆抗体，应用免疫磁珠阴性筛选法(Mini-MACS)去除粒细胞、T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞和巨噬细胞，rmGM-CSF和rmIL-4体外培养，以获得大量高纯度DC。在DC培养过程中加入小鼠OVHM卵巢癌细胞冻融抗原致敏DC。流式细胞仪检测DC的免疫表型，ELISA法检测DC培养上清分泌的细胞因子IL-12。 3.LAK细胞的制备和激活：无菌制备小鼠脾细胞悬液，利用梯度密度离心法收获脾淋巴细胞，体外IL-2培养扩增诱导为LAK细胞。肿瘤抗原致敏的DC与LAK细胞共培养，收获DC-LAK细胞。 4.DC诱导LAK细胞的体外杀伤实验：效应细胞分为小鼠脾淋巴细胞组、单纯LAK细胞组和与肿瘤抗原致敏DC共培养LAK细胞组(DC-LAK)；靶细胞为小鼠OVHM卵巢癌细胞，分别在效靶比为10∶1及50∶1的条件下以MTT法检测LAK细胞的体外杀伤活性。 5.动物实验：将小鼠OVHM卵巢癌细胞(5×105/只)接种于C57BL/6N×C3H/He杂交一代(B6C3F1)雌性小鼠右前肢腋窝皮下建立肿瘤模型，并随机分为四组，即：对照组(单纯注射PBS)、LAK治疗组、肿瘤抗原致敏DC治疗组、DC-LAK治疗组，每组6只。治疗从荷瘤第2天开始，收集LAK细胞、经OVHM抗原致敏DC和DC-LAK细胞，记数调整细胞浓度为1×108/ml，0.1ml/只，荷瘤周围皮下注射。从荷瘤第6天开始，每隔2天测一次肿瘤大小，按公式V=πab2/6计算瘤体积，第30天处死小鼠，剥离肿瘤组织称重并观察各组抑瘤效果有无差异。 结论：1小鼠骨髓细胞应用免疫磁珠阴性筛选方法在去除粒细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞、单核细胞和巨噬细胞后，体外联用rmGM-CSF和rmIL-4培养，经肿瘤细胞冻融抗原致敏，可扩增高纯度成熟DC。2肿瘤冻融抗原致敏的DC与LAK细胞共培养后可明显提高LAK细胞特异性杀伤小鼠卵巢癌细胞的作用。3通过小鼠卵巢癌荷瘤实验证实肿瘤冻融抗原致敏的DC能够增强LAK细胞抗肿瘤作用。

目录

摘要

英文缩写

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述树突状细胞和CD40L的抗肿瘤免疫作用的研究进展

致谢

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