喉鳞状细胞癌患者外周血CD8T细胞亚群改变和共刺激分子CD28、CD137的表达及意义

摘要

目的：通过研究喉鳞状细胞癌患者外周血中CD8+T淋巴细胞亚群的改变及T淋巴细胞表面共刺激分子CD28和CD137的表达，从而明确喉鳞状细胞癌患者机体的细胞免疫状态及共刺激分子在喉鳞状细胞癌发生、发展过程和肿瘤主动免疫中的作用。 方法1.研究对象：选择2005年2月—2006年1月在白求恩国际和平医院耳鼻咽喉-头颈外科经手术治疗和病理证实的喉鳞状细胞癌患者30例及对照组白求恩国际和平医院体检中心健康正常体检人员15例作为研究对象。所有患者均排除肝、肾疾病，免疫系统疾病，严重的心脑血管疾病及感染性疾病，入院前均未接受过放疗、化疗及免疫治疗。对所有患者均详细记录其临床病史和一般资料。喉癌患者按照2002年AJCC喉癌分期方案进行分期，Ⅰ期患者3例，Ⅱ期患者12例，Ⅲ期患者10例，Ⅳ期患者5例。喉癌患者按照病理组织学分级，其中，高分化癌(G1期)15例；中度分化癌(G2期)9例；低分化癌(G3期)6例。 2.分组设计：按照不同临床分期和不同病理分级标准为依据对研究对象进行划分：临床分期为Ⅰ期和Ⅱ期喉癌患者划为A组，Ⅲ期和Ⅳ期喉癌患者划为B组，高分化鳞癌患者(G1期)为C组，中度分化(G2期)和低分化鳞癌(G3期)患者为D组。 3.实验方法：正常对照组和术前的喉癌患者均于清晨6：00空腹取肘正中静脉血5ml，经肝素抗凝后，淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，尼龙棉柱法过滤纯化T淋巴细胞，台盼蓝染色法判定细胞活性，采用直接免疫荧光标记和流式细胞仪分析：(1)检测0小时CD8+、CD28+、CD8+CD28+、CD8+CD28-及CD137+T淋巴细胞在外周血T淋巴中的表达率；(2)测定经由非特异性增殖刺激物植物血凝素(PHA)体外刺激培养48小时后，活化的T淋巴细胞中CD137+T淋巴细胞的表达率。 4.统计学处理：应用SPSS13.0统计软件对所得数据进行统计学处理，计量资料用均数±标准差表示，在符合正态分布和方差齐的情况下，两组间比较用t检验，三组间比较采用方差分析，差别如有统计学意义，再进一步应用LSD法进行组间两两比较；如果方差不齐，则进行对数转换后再采用方差分析，差别如有统计学意义，应用LSD法进行组间两两比较；方差齐性检验以α=0.10为检验水准，其余以α=0.05为检验水准。 结果1.喉癌组CD8+T淋巴细胞表达率(32.11±5.07％)高于正常对照组(27.01±3.66％)，两组均数之间经统计学分析有显著性差异(P＜0.01)。不同临床分期及不同病理分级喉癌患者组CD8+T淋巴细胞表达率分别为：A组(31.36±5.06％)，B组(32.85±5.14％)，C组：(33.05±5.55％)，D组：(31.16±4.53％)。 2.正常对照组T淋巴细胞CD28+细胞的表达率(54.29±6.28％)高于喉癌患者组(45.53±4.51％)，经统计学分析有显著性差异(P＜0.01)。不同临床分期喉癌患者组及不同病理分级喉癌患者组CD28+T淋巴细胞表达率分别为：A组(44.85±4.23％)，B组(46.22±4.81％)，C组(45.88±5.18％)，D组(45.18±3.87％)。 3.正常对照组T淋巴细胞CD8+CD28+细胞的表达率为(15.97±2.13％)高于喉癌患者组(12.70±3.41％)，经统计学分析有显著性差异(P＜0.01)。不同临床分期及不同病理分级喉癌患者组CD8+CD28+T淋巴细胞表达率分别为：A组(10.81±1.81％)，B组(14.60±3.62％)，C组(13.48±2.58％)，D组(11.93±4.01％)。 4.正常对照组T淋巴细胞CD8+CD28-T淋巴细胞的表达率(11.31±2.99％)低于喉癌患者组(21.03±5.69％)，经统计学分析有显著性差异(P＜0.01)。不同临床分期及不同病理分级喉癌患者组CD8+CD28-T淋巴细胞表达率分别为：A组(20.84±5.42％)，B组(21.22±6.14％)，C组(21.22±6.15％)，D组(20.85±5.40％)。 5.0小时患者组未活化T细胞中CD137+T淋巴细胞(CD137+-0hT细胞)表达率(1.90±0.71％)明显高于正常对照组(0.79±0.40％)，统计学分析差别有显著性(P＜0.01)，不同临床分期和不同病理分级患者组CD137+-0hT淋巴细胞表达率分别为：A组(1.86±0.68％)，B组(1.94±0.77％)，C组(1.82±0.75％)，D组(1.99±0.69％)。 6.经PHA刺激活化48小时后，患者组活化的T细胞中，CD137+T淋巴细胞(CD137+-48hT细胞)表达率(19.51±3.63％)仍明显高于正常对照组(13.64±2.02％)，经统计学分析差异有显著性(P＜0.01)。不同临床分期和不同病理分级患者组CD137+-48hT淋巴细胞表达率分别为：A组(18.65±3.93％)，B组(20.36±3.20％)，C组(20.16±3.70％)，D组(18.86±3.57％)。 7.各患者组与正常对照组间分别比较CD8+、CD28+、CD8+CD28+、CD8+CD28-、CD137+-0h和CD137+-48hT淋巴细胞表达率，其差别均有统计学意义(P＜0.01)，但不同临床分期患者组间比较差异无统计学意义(P＞0.05)，不同病理分级患者组间比较差异亦无统计学意义(P＞0.05)。 8.不同患者组CD8+28-/CD137+-48h比值均明显小于正常对照组，不同患者组CD28+/CD137+-0h，CD28+/CD137+-48h，CD8+28+/CD137+-0h,CD8+28+/CD137+-48h,CD8+28-/CD137+-0h和CD137+-48h/CD137+-0h的比值均明显高于正常对照组，其差别有统计学意义(P＜0.01)。进一步分析，不同临床分期患者组间比较，各项比值均无统计学差异(P＞0.05)，同样不同病理分级患者组间比较，各项比值亦无统计学差异(P＞0.05)。 结论1喉癌患者免疫功能紊乱尤其以细胞免疫功能紊乱为主，外周血CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD28-T淋巴细胞亚群的改变可以作为了解喉癌患者免疫功能状态、辅助诊断以及明确预后的指标。 2共刺激分子CD28、CD137在喉鳞状细胞癌的发生、发展过程有着重要的作用。 3在进一步的喉鳞状细胞癌的主动免疫治疗中，转染CD28和CD137基因、增加抗CD28和CD137单抗的表达以及调节它们天然配体的表达有望成为一种有效的肿瘤免疫治疗新手段。

目录

摘要

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述共刺激分子与肿瘤主动免疫

致谢

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