孕哺期铅暴露对仔鼠大脑海马SS、AVP以及nNOS的影响

摘要

目的：通过在孕哺期对大鼠进行不同浓度的铅染毒，从铅对仔鼠海马各区生长抑素(somatotatin，SS)和精氨酸加压素(argninevasopressin，AVP)以及nNOS(neuronalnitricoxidesynthase,nNOS)影响的角度，来探讨孕哺期铅暴露对子代学习记忆影响的作用机制，为铅的预防和治疗提供理论依据。 方法：1动物的分组及染毒动物的制备：SD大鼠由军事医学科学院提供，共36只，其中雌鼠24只，雄鼠12只。将24只雌鼠随机分为四组，每组6只。分笼饲养7d后，按雌雄比2：1合笼，使其受孕，以次日凌晨在排泄托盘中发现阴栓阴道分泌物镜检发现精子者定为已受孕，并记为妊娠0d。 各组自妊娠第0d起，到仔鼠生后第30d止，按以下方式饲养：(1)对照组(饮用蒸馏水)；(2)0.025％染铅组(饮含质量分数为0.025％醋酸铅水)；(3)0.05％染铅组(饮含质量分数为0.05％醋酸铅水)；(4)0.1％染铅组(饮含质量分数为0.1％醋酸铅水)。染铅方式：将醋酸铅溶于蒸馏水中，若有沉淀，可加入少量醋酸铅溶解。为保证足够的营养，每窝最多留取10只仔鼠。 2标本的采集：仔鼠生后第21d断乳后，每一组随机从6窝中选取36只仔鼠(雌雄各半)，其中12只经10％水合氯醛以0.35ml/100mg的剂量腹腔麻醉后，从左心室进针取血1ml用于检测血铅，取全脑，测量脑铅值；另取12只麻醉后开胸，左心室插入灌注针，剪破右心耳，之后快速依次灌注生理盐水100～150ml,4℃的4％多聚甲醛250ml,于30～40min灌毕。迅速取脑置4℃的同样固定液中后固定7～9h后移入20％蔗糖浸泡12小时以上，组织切片机切片备用。剩余的12只于生后第30d后进行Y-迷宫试验。 3Y-迷宫试验：仔鼠生后第30d后进行，记录错误次数。 4试验方法：采用石墨炉原子吸收法测定血铅及脑铅值；应用免疫组织化学的方法测定仔鼠海马SS、AVP以及nNOS阳性神经元数量的变化。Y-迷宫试验用于检测仔鼠的学习记忆能力。 结果：1血铅及脑铅：血铅及脑铅值都有随着染铅剂量的增加而升高的趋势；0.05％组和0.1％的血铅值与对照组比较，明显高于对照组(P＜0.05)；脑铅值各染铅组均高于对照组，有统计学差异(P＜0.05)。 2Y-迷宫试验：各组仔鼠完成Y-迷宫实验的错误次数有随着染铅浓度的增加而增多的趋势。在训练阶段0.05％和0.1％染铅组仔鼠完成Y-迷宫实验的错误次数均比对照组增多，差异有显著性(P＜0.05)；0.025％染铅组大鼠完成Y-迷宫实验错误次数与对照组比较，差异无显著性(P＞0.05)；在保持阶段0.1％染铅组大鼠完成Y-迷宫实验错误次数均比对照组明显增多，差异有显著性(P＜0.05)。 3SS：海马CA1区0.05％组和0.1％组与对照组比较，有统计学差异(P＜0.05)；0.025％组和对照组比较，SS阳性神经元数目无明显减少，无统计学差异(P＞0.05)。在海马CA3区各染铅组SS阳性神经元数目与对照组相比均无统计学差异(P＞0.05)。 4AVP：在海马CA1和CA3区，0.1％组的AVP阳性神经元数目与对照组比较均明显减少，有统计学差异(P＜0.05)；而0.025％组和0.05％组AVP阳性神经元数目与对照组比较在CA1和CA3区无明显减少，无统计学差异(P＞0.05)。 5nNOS：0.05％组和0.1％组与对照组比较，海马CA1区nNOS阳性神经元数目明显减少，染色较浅，有统计学差异(P＜0.05)；各染铅组海马CA3区nNOS阳性神经元数目与对照组比较无统计学差异(P＞0.05)。 60.025％染铅组与对照组比较，除脑铅值外其他各项指标指标均无统计学意义(P＞0.05)。 结论：1血脑屏障和胎盘屏障对铅的阻挡作用很小，既使孕哺期低浓度铅暴露，铅也可以在仔鼠脑内蓄积，并损害其学习记忆能力。 2铅可以使仔鼠海马区AVP和SS阳性神经元数目减少，降低了AVP和SS的蛋白在海马区的表达，从而损伤仔鼠的学习记忆能力。 3铅可以使仔鼠海马的nNOS阳性神经元的数目减少，降低了nNOS的蛋白在海马区的表达，影响NO的合成，从而损害学习记忆能力。 4铅的神经毒性作用在海马CA1区表现比较显著。 5SS、nNOS比AVP对铅的损害更加敏感。

目录

摘要

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述国产期铅暴露对胎儿神经系统影响的研究进展

致谢

个人简历