参附注射液对脑缺血再灌注损伤保护作用的系列研究

摘要

第一部分线栓法兔局灶性脑缺血/再灌注模型的制作及影像学评价目的：探讨建立稳定的线栓法兔脑缺血/再灌注模型，并对其进行MR影像学和神经功能评价。 方法：健康新西兰白兔40只，随机分为三组：A组5只，进行颈内动脉血管造影检查；B组5只，为假手术组；C组30只，选择直径0.45mm的导丝直接从CCA经ICA插至MCA起始部，3h后抽回导丝至CCA内进行线栓法局灶性脑缺血/再灌注模型的制作，并利用MRI和神经功能缺损评分对模型进行评价。 结果：血管造影可以清晰地显示颈内动脉的走行及其颅内分支情况，22只动物脑缺血/再灌注模型成功。MRI能清晰显示脑组织的病理改变，脑缺血/再灌注后1h神经功能缺损评分为2.8±0.45。 结论：采用直径0.45mm的导丝直接从CCA经ICA插至MCA起始部，再灌注时，抽回导丝至CCA内可用于建立较稳定(22/30)、长期存活并适合影像学研究的脑缺血/再灌注模型。 第二部分兔局灶性脑缺血再灌注损伤后的MRI表现和病理改变对照研究 目的：研究兔局灶性脑缺血/再灌注损伤后的系列MRI动态演变过程，并将其与病理改变相对照。 方法：健康新西兰白兔27只，随机分为二组：A组5只，为假手术组；B组22只，为线栓法局灶性脑缺血/再灌注模型组。于缺血3h/再灌注后1h(4只)、3h、6h、12h、1d、3d、7d(各3只)行头颅MR扫描，扫描序列包括T1WI、T2WI、FLAIR(液体衰减反转恢复)、DWI(弥散加权成像)、PWI(灌注加权成像)及强化后T1WI扫描，观察缺血再灌注后脑组织T2WI、DWI、PWI、强化后T1WI信号参数以及梗死体积的改变。兔脑切片光镜HE染色及电镜下观察缺血区组织形态学变化，同时应用免疫组化法观察缺血区GFAP、MAP-2、HSP-70及MMP-9的演变过程。 结果：缺血3h/再灌注后MRI可见左侧大脑半球颞顶叶及外侧基底节异常信号。缺血3h/再灌注后1d天内左侧大脑半球病变T2信号强度逐渐增加，随后开始下降，而ADC(表观弥散系数)值的变化与此相反，缺血再灌注后早期增强MRT1WI可见明显异常对比增强高信号影。脑梗死体积于缺血再灌注后1d时最大，其与梗死的T2WI信号动态演变过程呈高度直线相关。以T2WI信号(rSI)为自变量，相对梗死体积(％HLV)为应变量的直线回归方程为：Y=-6.126+18.6249X。PWI上相对脑血流量(rCBF)左侧大脑半球梗死区表现为持续低灌注，梗死周围区早期表现为高灌注，3d及7d时与对侧大脑半球灌注基本相同。光镜HE染色及电镜下可见脑组织缺血坏死和细胞水肿于1d时表现最为明显。免疫组化染色可见缺血中心区1d时无GFAP及MAP-2染色阳性细胞。梗死周围区GFAP阳性细胞染色的积分光密度(OD)值于缺血再灌注后3h开始增加，1d时达到高峰，3d与1d时相似，7d时稍下降。缺血周围区MAP-2染色加深，MAP-2阳性细胞染色的积分光密度值(0D)于缺血再灌注后1d时明显增高，持续至第7d，高于假手术组及对侧大脑半球。脑缺血再灌注后1h即可见HSP-70阳性免疫反应细胞，再灌注后1dHSP-70阳性细胞染色的积分光密度值(0D)达高峰，其后逐渐下降，阳性免疫细胞主要位于缺血灶的周围。脑缺血再灌注后3h缺血中心区周边的MMP-9阳性细胞染色的积分光密度值(OD)升高，于1d内达到高峰，7d时阳性细胞染色强度下降。 结论：兔局灶性脑缺血/再灌注损伤后的系列MRI动态演变过程与光镜HE染色、电镜及GFAP、MAP-2、HSP-70、MMP-9免疫组化染色的结果是一致。 第三部分参附注射液对兔局灶性脑缺血/再灌注损伤保护作用的实验研究 目的：应用MRI研究参附注射液对兔局灶性脑缺血/再灌注损伤后的神经保护作用，并将与其与病理改变相对照，以了解其可能机制。 方法：健康新西兰白兔54只，随机分为三组：A组5只，为假手术组；B组19只，为线栓法局灶性脑缺血/再灌注模型+5％葡萄糖注射液组，即对照组，C组30只，为线栓法局灶性脑缺血/再灌注模型+参附注射液组，即治疗组。于缺血3h/再灌注后1h、3h、6h、1d、3d、7d行头颅MR扫描，扫描序列包括T1WI、T2WI、FLAIR(液体衰减反转恢复)、DWI(弥散加权成像)、PWI(灌注加权成像)及强化后T1WI扫描，观察缺血再灌注后参附注射液治疗组与对照组脑组织T2WI、DWI、PWI、强化后T1WI信号参数以及梗死体积的改变。兔脑切片光镜HE染色及电镜下观察缺血区组织形态学变化，同时应用免疫组化法观察缺血区GFAP、MAP-2、HSP-70及MMP-9的演变过程。比较并分析参附注射液治疗组与对照组MRI及病理学表现的差别以研究其可能的作用机制。 结果：缺血3h/再灌注后MRI可见左侧大脑半球颞顶叶及外侧基底节异常信号。B组缺血3h/再灌注后1d天内左侧大脑半球病变T2信号强度逐渐增加，随后开始下降，而ADC(表观弥散系数)值的变化与此相反。C组与B组相比ADC值的变化没有太大差别，但T2WI信号的演变不同，其高峰时间提前，而且峰值较对照组减低。强化后MRT1WI异常对比信号增高影C组轻于B组，治疗组血脑屏障的损伤程度较对照组轻，最终梗死体积小于对照组。参附注射液治疗组梗死周围区高灌注比对照组稍有降低的趋势。光镜HE染色及电镜下脑组织缺血坏死和细胞水肿B组于1d时表现最为明显，而C组在6h内表现最为明显。免疫组化染色可见缺血中心区1d时无GFAP及MAP-2染色阳性细胞。B组免疫组化染色结果与上部分兔局灶性脑缺血再灌注模型组相同，C组参附注射液治疗组缺血中心区范围小于B组对照组，其梗死周围区GFAP阳性细胞染色的积分光密度(OD)值于缺血再灌注后1h即开始增高，1d时达高峰，随后逐渐下降。C组梗死周围区MAP-2染色也于1d时增加，持续至第7d，染色强度高于B组对照组。B组与C组脑缺血再灌注后1h均可见HSP-70阳性免疫反应细胞，再灌注后1dHSP-70阳性细胞染色的积分光密度值(OD)达高峰，其后逐渐下降，但C组HSP-70阳性细胞染色强度的峰值高于B组。C组参附注射液治疗组MMP-9阳性细胞染色强度也于3h后开始增高，1d时的积分光密度值(OD)与6h时比较无显著增加，但低于B组1d时的染色强度。 结论：参附注射液对脑缺血再灌注损伤有一定的保护作用，尤其是在减轻血管源性水肿方面。它可能是通过对缺血周围区GFAP、MAP-2、HSP-70的诱导表达增加或调节以及减低MMP-9的表达来实现其保护作用的。

目录

摘要

英文缩写

引言

第一部分 线栓法兔局灶性脑缺血/再灌注模型的制作及影像学评价

第二部分 兔局灶性脑缺血再灌注损伤后的MRI表现和病理改变对照研究

第三部分 参附注射液对兔局灶性脑缺血/再灌注损伤保护作用的实验研究

结论

综述

致谢

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