全反式维甲酸联合放射线照射对食管癌细胞周期、凋亡及NF-κB、β-catenin、CyclinD1表达的影响

摘要

目的：我国是食管癌高发国，其死亡率居恶性肿瘤的第四位，严重影响了人类的生命和健康。由于大多数食管癌发病隐匿，多数患者就诊时己属中晚期，失去了手术的时机，因此寻找更为合理有效的治疗方法成为食管癌治疗领域研究的热点。化学药物治疗在食管癌的综合治疗中占有越来越重要的地位。全反式维甲酸(ATRA)是迄今为止研究最为深入、作用最强的化疗药物之一，但单独应用ATRA毒副作用大，易产生继发性耐药。应用放化疗联合，可以减少化疗药物的剂量，减轻其副作用，达到协同增效的结果，因此探索ATRA与放射线联合应用是肿瘤研究的一个重要方向。 本研究选择食管癌细胞Eca109作为研究对象，通过检测ATRA联合放射线照射对食管癌细胞周期、凋亡的影响及NF-KB、β-catenin、CyclinD1蛋白表达的调节，试图为食管癌的临床治疗提供理论依据。 方法：1 MTT比色法检测不同浓度ATRA作用24小时、48小时、72小时后对食管癌细胞Eca109生长抑制率的影响。选取ATRA作用48小时后抑制率约为25％、50％的药物浓度作为流式细胞术及细胞免疫化学的检测浓度。 2应用流式细胞术检测Eca109细胞周期及凋亡率。实验分为：对照组：不做任何处理；ATRA处理组：终浓度分别为0.781amol/L、5μmol/L的ATRA；60Coγ放射线照射组： 6Gy单次照射；ATRA联合60Coγ射线处理组：6Gy单次照射后分别加入0.78μmol/L、51μmol/L的ATRA。以上各组分别作用24小时、48小时后上机检测。 3采用免疫细胞化学法检测51μmol/L ATRA处理48h前后Eca109细胞NF-κB/β-catenin、CyclinD1蛋白的表达情况。 4应用流式细胞术检测各组Eca109细胞NF-κB、β-catenin、CyclinDl蛋白表达。实验分组方法同2。 5实验数据经统计软件SPSS11.5处理，采用单因素方差分析、两样本的t检验、直线相关分析，以α=0.05为差异显著性标准。 结果：1 MTT比色法检测结果显示：随ATRA浓度的增加，Eca109细胞生长抑制率上升。各浓度组和对照组相比，有显著性差异(P＜0.05)。 2.Eca109细胞在浓度为0.78gmol/L的ATRA作用24小时后，G0/G1期细胞比例由35.40±1.57％增至40.47±1.96％，当ATRA浓度增加为5μmol/L时，G0/G1期细胞比例增至46.1 3±0.68％，两组相比有显著性差异（P＜0.05)；6Gy放射线照射后24小时，G0/G1期细胞比例为38.73±1.33％；0.78μmol/L的ATRA与放射线联合作用后24小时，G0/G1期细胞比例增至48.13±0.90％，5μmol/L的ATRA与放射线联合作用，G0/G1期细胞比例增至51.30±1.04％，两组相比有显著性差异(P＜0.05)；ATRA联合放射线作用组与各单独作用组相比有显著性差异(P＜0.05)；各作用组与对照组相比有显著性差异(P＜0.05)。 ATRA、放射线及两者联合分别作用48小时，Eca109细胞周期时相变化的分析结果与作用24d,时的分析结果一致。 3.Eca109细胞在浓度为0.78μmol/L的ATRA作用245时后，凋亡率由1.68±0.1 6％增至3.4 1±0.26％，当ATRA浓度增加为5gmol/L时，凋亡率为5.03±0.23％，两组相比有显著性差异(P＜0.05)；6Gy放射线照射后24小时，凋亡率增至2.69±0.1 6％；0.78μmol/L的ATRA与放射线联合作用后245时，凋亡率为8.00±0.48％，5μmol/L的ATRA与放射线联合作用，凋亡率增至11.44±0.5 1％，两组相比有显著性差异(P＜0.05)；ATRA联合放射线作用组与各单独作用组相比有显著性差异(P＜0.05)；各作用组与对照组相比有显著性差异(P＜0.05)。 ATRA、放射线及两者联合分别作用48小时，Eca109细胞凋亡的变化的分析结果与作用24小时的分析结果一致。 4浓度为5μmol/L的ATRA的作用48d小时后，Eca109细胞NF-KB、β-catenin、CyclinD1阳性细胞表达率均降低，显著低于对照组(P＜0.05)。 5 ATRA作用Eca109细胞24d小时、485时后，NF-κB、β-catenin、CyclinD1蛋白表达降低，且随着药物浓度的增加其蛋白表达降低显著(P＜0.05)；放射线单独作用24小时、48小时其蛋白表达降低较少；ATRA联合放射线作用组与各单独作用组相比有显著性差异(P＜0.05)，且随着药物浓度的增加其蛋白表达降低显著(P＜0.05)；各作用组与对照组相比有显著性差异(P＜0.05)。NF-κB、CyclinD1蛋白表达呈正相关(P＜0.05)，β-catenin、CyclinD1蛋白表达呈正相关(P＜0.05)，NF-κB、β-catenin蛋白表达呈正相关(P＜0.05)。 结论：1 ATRA对Eca109细胞的生长抑制具有浓度依赖效应关系，随着浓度的增加细胞生长抑制率上升。 2.ATRA联合放射线照射能更有效地阻止Eca109细胞由G0/G1期向S期转化、诱导Eca109细胞凋亡，且随着药物浓度增加，作用更加明显。 3 ATRA联合放射线照射能协同抑制Eca109细胞NF-κB、β-catenin、CyclinD1蛋白表达，有浓度依赖效应关系；并且NF-κB、β-catenin、CyclinD1蛋白表达水平呈两两正相关。

目录

声明

摘要

前 言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述NF-κB、β-catenin与肿瘤发生的研究进展

致谢

个人简历