全反式维甲酸联合放射线照射对食管癌细胞TE13作用研究和对CyclinD1、VEGF及E-cadherin表达的影响

摘要

目的：我国是食管癌的高发国家之一，细胞周期素D1(CyclinD1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEG F)和E-钙粘蛋白(E-cadherin)分别在肿瘤增殖、侵袭及转移不同阶段发挥重要作用。全反式维甲酸(all-trans retinoic acid，ATRA)是一种理想的诱导分化剂，可以诱导多种肿瘤细胞分化、并逆转其恶性表型。单用ATRA毒副作用大，易产生继发性耐药。本实验研究了多种浓度、不同时间条件下ATRA对人食管癌细胞株TE13体外增殖情况的影响；单用ATRA和ATRA联合低剂量射线，探讨其对TE13凋亡、周期的影响以及是否具有协同增效作用。另外还探讨了单用ATRA和ATRA联合低剂量射线，对TE13细胞CyclinD1、VEGF和E-cadherin的表达改变的影响以及三者之间的相关性；为食管癌的临床治疗提供理论依据。 方法： 1.体外培养TE13细胞。 2以化疗药物ATRA和60Coγ射线为处理因素。 3.MTT比色法测定不同浓度ATRA处理组分别作用12h、24h、48h和72h后，对TE13细胞的吸光度(OD值)和细胞增殖抑制率(Inhibition Rate，IR％)的影响。并以48h的IR％为标准，选取分别达到约25％、50％以及75％的药物浓度作为流式细胞术(flow cytometry,FCM)及免疫细胞化学(sP法)的检测浓度。 4分组：设ATRA处理组(终浓度分别为0.78 μ mol/L、6.25μ mol/L、12.5 μ mol/L)和ATRA联合γ射线处理组(0.78 μmol/L+4Gy、6.25 μ mol/L+4Gy、12.5 μ mol/L+4Gy)以及正常对照组分别作用24h和48h，用FCM对TEl3细胞进行凋亡率的检测以及周期分析、并检测CyclinD1、VEGF和E-cad三种蛋白表达的改变情况；SP法测各组CyclinD1、VEGF和E-cad表达变化情况。 5实验数据经SPSS13.0统计软件处理，采用重复测量设计方差分析，方差齐性检验、单因素方差分析，两两比较SNK-q检验以及直线相关性分析，P＜0.05为统计学上的显著性差异。 结果： 1在浓度为0.39 μ mol/L至12.5 μ mol/L浓度范围内，ATRA对TE13细胞的抑制作用呈现剂量依赖效应关系和时间依赖效应关系。 2.TE13经ATRT及ATRT联合γ射线分别处理24h和48h，细胞增殖能力明显下降，更多的细胞被阻滞于G0/G1期，细胞凋亡明显增加，其中以两者联合应用更为显著。 3.FCM检测结果表明，单用ATRA和联合γ射线分别作24h、48h，随剂量增大，CyclinD1、VEGF的平均荧光指数(FI)值递减，E-cad的FI值递增，且联合剂量和对应单药相比，效果更明显。 4各处理组作用于TE13细胞24h，FCM测FI值示，CyclinD1和VEGF呈显著正相关(r=0.95，P＜0.05)，CyclinD1和E-cad呈显著负相关(r=-0.885，P＜0.05)，VEGF他E-cad呈显著负相(r=-0.91 8，P＜0.05)。 5各处理组作用于TEl3细胞48h，FCM测FI值示，CyclinD1和VEGF呈显著正相关(r=0.972，P＜0.05)，CyclinD他E-cad呈显著负相关(r=-0.953，P＜0.05)，VEGF和E-cad呈显著负相关(r=-0.962，P＜0.05)。 6 单用ATRA及ATRA联合60Co γ射线作用48h，SP法检测TEl3细胞CyclinD1、VEGF和E-cad蛋白表达结果。结果示随剂量增大，CyclinD1、VEGF阳性细胞百分率递减，E-cad阳性细胞百分率递增，且联合剂量和对应单药相比，效果显著。相关性分析示，CyclinD1和VEGF呈显著正相关(r=0.752，P＜0.05)，CyclinD1和E-cad呈显著负相关(r=-0.775，P＜0.05)，VEGF和E-cad呈显著负相关(r=-0.738，P＜0.05)。 结论： 1.ATRA对TEl3细胞具有明显的增殖抑制作用，呈现剂量以及时间依赖性。 2.ATRA能诱导TEl3细胞凋亡并将其阻断于G0/G1期，呈剂量依赖性；联合γ射线，二者能协同抑制食管癌TEl3细胞的恶性增殖并促使其凋亡。 3.ATRA能下调TEl3细胞CyclinD1、VEGF蛋白表达，上调E-cad蛋白表达，且呈浓度依赖效应关系；ATRA联合Y射线应用能协同增强这一效应。 4 CyclinDl、VEGF表达呈正相关，CyclinD1、E-cad表达呈负相关，VEGF、E-cad表达呈负相关。

目录

声明

摘要

第一部分全反式维甲酸联合放射线照射诱导食管癌细胞TE13凋亡及其对细胞周期影响的研究

前 言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

第二部分全反式维甲酸联合放射线照射对食管癌细胞TE13 CyclinD1、VEGF及E-cadherin表达影响

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 CyclinD1、VEGF和E-cadherin在食管癌的研究进展

致谢

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