温润通络方对糖尿病大鼠大血管内皮细胞凋亡的影响

摘要

目的：温润通络方（由仙灵脾、桂枝、木瓜、白芍、生地黄、女贞子、旱莲草、川芎、地龙、蜈蚣、五灵脂、生蒲黄等药物组成）具有温通经络，养阴润燥，活血化瘀之功效，为导师经临床观察筛选的效方，对糖尿病大血管并发症具有较好的治疗效果。为了进一步探讨其作用机理，参照相关文献制造糖尿病大鼠动物模型，同时施加药物干预，观察了其对糖尿病大鼠大血管内皮细胞凋亡及相关调控基因的影响，探讨了其抗细胞凋亡、保护大血管内皮的作用机制，并运用HE染色方法观察了本方对大血管内皮组织形态学的影响。
　　 方法：选用SD雄性大鼠50只，体重200～220g。大鼠自由饮水进食，饲养于18℃～22℃明暗各12小时的清洁级动物实验室内。正常喂养1周后，随机分为5组：正常对照组（N）、模型对照组（M）、温润通络方高剂量组（H）、温润通络方低剂量组（L）、阳性药（血府逐瘀汤）对照组（X）。参照相关文献，除正常对照组外，其它各组大鼠腹腔注射1％链脲佐菌素枸橼酸缓冲液（枸橼酸缓冲液为0.1mmol/L，pH4.5），按55mg/kg体重剂量一次性腹腔注射造模，72h后断尾取血测定血糖值，凡血糖值大于16.7mmol/L，大鼠尿量及饮水量明显增多，则造模成功。正常对照组大鼠腹腔注射相应体积的1％枸橼酸缓冲液。温润通络方高、低剂量组以及血府逐瘀汤对照组，并用相应药物灌胃治疗，每天1次，共灌胃8周。正常对照组和模型对照组给予生理盐水灌胃，每天1次，每次用量体积均按1ml/100g体重计算，共灌胃8周。于末次灌胃后禁食不禁水12h，2％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后取材制作标本。HE染色，光镜下观察大血管内皮组织形态学变化。
　　 结果：
　　 1.一般行为观察
　　 实验期间，正常组生长良好，饮食正常，反应灵敏，体重增长明显。模型组大鼠很快出现多饮，多食，多尿，形体逐渐消瘦，皮毛凌乱，色枯无泽，甚至有少量脱落，蜷卧扎堆，活动减少，精神萎靡等表现。温润通络方高、低剂量组及血府逐瘀汤对照组大鼠情况均较模型组为轻。
　　 2.温润通络方对实验性糖尿病大鼠大血管内皮组织形态学的影响
　　 结果显示，正常组细胞纹理清晰，走形正常，胞浆着色均匀，动脉内皮细胞扁平，内膜平坦，中膜平滑肌细胞（smooth muscle cell，SMC）与弹力板平行相间排列。模型组大鼠动脉壁出现局限性内膜增厚，中膜浅层平滑肌细胞（SMC）可见增生、排列紊乱，病灶处的弹力板呈波浪状或交织状排列，有断裂分离现象。温润通络方高、低剂量组及血府逐瘀汤对照组的组织形态变化均比模型组有明显减轻。
　　 3.温润通络方对实验性糖尿病大鼠血液流变学的影响
　　 3.1各组大鼠血浆黏度比较：
　　 与正常组血浆黏度（1.48±0.99）比较，模型组（2.11±0.25），各治疗组（1.81±0.84）、（1.98±0.11）、（1.95±0.07）均明显增加（P<0.01）；与模型组比较，各治疗组血浆黏度均明显降低（P<0.01或P<0.05）。
　　 3.2各组大鼠全血高切还原黏度比较：
　　 与正常组全血高切还原黏度（4.19±0.36）比较，模型组（7.57±0.28），各治疗组（6.11±0.22）、（6.51±0.26）、（6.49±0.34）均明显增加（P<0.01）；与模型组比较，各治疗组全血高切还原黏度均明显降低（P<0.01）。
　　 3.3各组大鼠全血低切还原黏度比较：
　　 与正常组全血低切还原黏度（9.37±1.93）比较，模型组（18.53±1.49），各治疗组（14.39±1.03）、（16.30±1.47）、（16.08±1.47）均明显增加（P<0.01）；与模型组比较，各治疗组全血低切还原黏度均明显降低（P<0.01）。
　　 3.4各组大鼠纤维蛋白原比较：
　　 与正常组纤维蛋白原（2.25±0.19）比较，模型组（3.47±0.20），各治疗组（2.89±0.27）、（3.27±0.18）、（3.11±0.12）均明显增加；与模型组比较，各治疗组纤维蛋白原均明显降低。
　　 4.温润通络方对实验性糖尿病大鼠大血管内皮细胞凋亡率的影响
　　 正常组比较，模型组大鼠股动脉内皮和主动脉内皮细胞凋亡率显著高于正常组（P<0.05）。经药物干预后，各治疗组与模型组比较，细胞凋亡率均明显减小，差别有统计学意义（P<0.01）。其中，温润通络方低剂量组细胞凋亡率高于高剂量组，差别有统计学意义（P<0.05），而血府逐瘀汤对照组与低剂量组比较无明显差异（P>0.05）。
　　 5.温润通络方对实验性糖尿病大鼠大血管内皮Bcl-2和Bax蛋白表达的影响
　　 与正常组比较，模型组大鼠股动脉内皮和主动脉内皮细胞凋亡明显增高（P<0.01），Bcl-2/Bax比值显著下降（P<0.05），Bcl-2蛋白表达显著降低，而Bax蛋白表达增加，差别有统计学意义（P<0.05）。经用药干预后，温润通络方高、低剂量组和血府逐瘀汤对照组与模型组比较，Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax比值显著增大（P<0.05），Bax蛋白表达显著下降（P<0.05）。说明Bcl-2蛋白表达量增加则细胞凋亡率降低，而Bax蛋白表达量增加则细胞凋亡率增加。各用药治疗组中，高剂量组Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax比值均高于低剂量组（P<0.05）；低剂量组与血府逐瘀汤对照组之间各项指标无明显差异（P>0.05）。
　　 结论：
　　 1.温润通络方可降低糖尿病大鼠血浆黏度，降低全血高切还原黏度，降低全血低切还原黏度，降低纤维蛋白原，降低血浆甘油三酯，抑制血栓形成。
　　 2.温润通络方可明显改善糖尿病大鼠大血管内皮组织学的病变程度，表现为用药后动脉壁局限性内膜增厚少见，中膜浅层平滑肌细胞近似平行相间排列，断裂分离现象较少。说明本方对大血管内皮有保护作用。
　　 3.温润通络方能通过促进Bcl-2蛋白表达，抑制Bax蛋白表达，降低大血管内皮细胞凋亡率，以保护血管内皮，从而达到抗血管病变的作用，此可作为温润通络方治疗糖尿病血管病变的作用机制之一。

目录

文摘

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论文说明：英文缩写

声明

引言

第一部分温润通络方对糖尿病大鼠大血管内皮组织形态学的影响

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第二部分温润通络方对糖尿病大鼠大血管内皮细胞凋亡的影响

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

结论

综述中医药治疗糖尿病及血管并发症的研究近况

致谢

个人简历