新交泰丸对顺铂肾毒性大鼠TIMP-1表达的影响

摘要

目的：顺铂（cisplatin，DDP）是一种有效的抗肿瘤药物，但其严重的肾毒性，限制了它在临床上的广泛应用。本实验通过研究新交泰丸对DDP肾毒性模型大鼠肾组织中基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）表达的影响，初步探讨其对DDP肾毒性的影响作用，从而为中医药对抗DDP肾毒性提供实验依据。
　　 方法：取健康成年雄性SD大鼠60只，体重180g～220g。适应性喂养1周后，将其随机分为5组（每组12只）：空白对照组（简称空白组）、模型对照组（简称模型组）、苯那普利阳性对照组（简称苯那普利组）、新交泰丸低剂量组（简称低剂量组）和新交泰丸高剂量组（简称高剂量组）。除空白组外，其余各组给予DDP（用生理盐水配成1mg/ml）尾静脉注射5mg/kg，每周一次，连续3周，制备DDP肾毒性大鼠模型，空白组给与等量的生理盐水替代DDP尾静脉注射。在第一次尾静脉注射DDP后开始灌胃给药，每天一次，连续6周。其中空白组和模型组，灌服温生理盐水（1ml/100g），苯那普利组灌服等量的苯那普利（相当于1mg/kg/d），低剂量组和高剂量组分别灌服等量的低剂量新交泰丸（相当于5g生药/kg/d）和高剂量新交泰丸（相当于15g生药/kg/d）。每天观察大鼠的活动情况和一般状态。剖杀前称重，将其置于代谢笼中，禁食不禁水，收集24h尿液，测24h尿蛋白（Upro）和N-乙酰β-D氨基葡萄糖苷酶（NAG）。将大鼠麻醉后（10％水合氯醛4ml/kg），股动脉采血，测定血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）的水平。剖取肾脏组织，石蜡包埋切片，做HE、Masson、PAS染色。运用免疫组化技术分别检测各组大鼠肾组织中TIMP-1的表达，利用HPIAS2000型计算机图像分析系统分析各组大鼠TIMP-1的平均光密度值。
　　 结果：
　　 1、新交泰丸对各组大鼠尿中24h Upro、NAG含量的影响
　　 与空白组（8.32±2.06mg/d）比较，模型组大鼠24h Upro含量（14.59±3.97mg/d）显著升高（P<0.01）；低剂量组（9.14±2.58 mg/d）、高剂量组（9.80±3.03 mg/d）和苯那普利组（10.39±3.33 mg/d）较模型组大鼠24hUpro含量明显降低（p<0.01或p<0.05）；各治疗组间比较，低剂量组、高剂量组较苯那普利组大鼠24h Upro含量降低，但无显著性差异（p>0.05）；低剂量组与高剂量组相比，无显著性差异（p>0.05）。
　　 与空白组（2.99±0.27 U/L）比较，模型组（4.90±0.90U/L）大鼠尿NAG含量显著升高（P<0.01）；低剂量组（3.74±0.76U/L）、高剂量组（3.75±0.86 U/L）和苯那普利组（3.80±0.87U/L）较模型组大鼠尿NAG含量明显降低（p<0.01或p<0.05）；低剂量组、高剂量组和苯那普利组各组间比较，无显著性差异（p>0.05）。
　　 2、新交泰丸对各组大鼠血清BUN，Scr的影响
　　 与空白组（5.31±0.89 mmol/L）比较，模型组（22.70±5.98mmol/L）大鼠血清BUN显著升高（P<0.01）；低剂量组（14.07±3.88 mmol/L）、高剂量组（13.87±2.73 mmol/L）和苯那普利组（16.70±4.40 mmol/L）较模型组大鼠血清BUN含量明显降低（p<0.01或p<0.05）；低剂量组、高剂量组和苯那普利组各组间比较，无显著性差异（p>0.05）。
　　 与空白组（108.08±11.94umol/L）比较，模型组（142.13±12.92umol/L）大鼠血清Scr显著升高（P<0.01）；低剂量组（115.42±11.71 umol/L）、高剂量组（118.44±14.85umol/L）和苯那普利组（123.18±14.18 umol/L）较模型组大鼠血清Scr含量明显降低（p<0.01或p<0.05）；低剂量组、高剂量组和苯那普利组各组间比较，无显著性差异（p>0.05）。
　　 3、新交泰丸对各组大鼠肾组织形态学的影响
　　 经HE、Masson、PAS染色后光镜观察：空白组大鼠肾组织无明显病理改变；模型组大鼠肾小管萎缩，管腔内有大量的蛋白管型，肾小管上皮细胞水肿、变性、坏死、脱落，肾小管上皮基膜不均匀增厚、皱缩，间质大量炎细胞浸润、胶原组织和成纤维细胞增多；低剂量组、高剂量组和苯那普利组上述改变均较模型组减轻，肾小管轻度萎缩，管型减少甚至消失，间质可见多少不等的炎细胞浸润、少量纤维组织增生，肾小球的结构基本正常。
　　 4、新交泰丸对各组大鼠肾组织 TIMP-1的表达及其平均光密度值的影响
　　 空白组大鼠肾小管上皮细胞内TIMP-1微弱阳性表达，肾小球及肾间质细胞内少有表达；与空白组相比，模型组大鼠肾小管上皮细胞内TIMP-1的表达明显增强；与模型组相比，苯那普利组、低剂量组、高剂量组大鼠小管上皮细胞内TIMP-1的表达明显减弱。
　　 图像分析显示：与空白组（0.0479±0.0309）相比，模型组大鼠TIMP-1的平均光密度值（0.1605±0.0239）显著增高，差异具有统计学意义（p<0.01）；低剂量组、高剂量组和苯那普利组大鼠TIMP-1平均光密度值分别为（0.0686±0.0296，0.0739±0.0361，0.0863±0.0369），均较模型组显著降低，（p<0.01）；低剂量组、高剂量组和苯那普利组各组间比较，差异无显著性（p>0.05）。
　　 结论：
　　 1、采用尾静脉注射DDP造模后大鼠尿NAG、24hUpro，血清BUN、Scr明显升高，肾小管间质炎细胞浸润、纤维组织增生，肾小管上皮细胞内TIMP-1表达上调。
　　 2、新交泰丸可明显降低DDP肾毒性大鼠尿NAG、24h Upro的含量及血清Scr、BUN水平，减轻DDP所致肾小管损伤和肾小管间质的纤维组织增生，下调肾小管上皮细胞内TIMP-1的表达。
　　 3、新交泰丸对DDP所致肾损伤的保护作用可能是通过干预肾小管上皮细胞内TIMP-1的表达而实现的。

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综述 中医药抗顺铂肾毒性的研究进展

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