SHIP2基因在慢性粒细胞性白血病细胞中的表达及意义的研究

摘要

目的：慢性粒细胞性白血病是一种起源于异常造血干细胞克隆的骨髓增生性疾病其病变克隆中存在t（9，22）染色体的异常，形成BCR/ABL融合基因，其编码的蛋白具有酪氨酸激酶活性，可异常激活PI3K途径，促进CML的发病发展。SHIP2属于肌醇5-磷酸酶家族，表达非常广泛，可将PI3K途径最重要的第二信使磷脂酰肌醇3，4，5-三磷酸（PI（3，4，5）P（3））5'端去磷酸化。而且SHIP2可选择性地与ABL的SH3区结合提示其在CML发病过程中可能发挥着非常重要的作用。因而有必要对人类慢性粒细胞性白血病患者及应用酪氨酸激酶抑制剂后的慢粒患者细胞中SHIP2的表达情况进行检测以了解其与该病的联系及作用机制。另外，CXCR4是近来备受关注的一种受体。已证实它与多种细胞生物学行为如归巢、黏附等为有关。在乳腺癌细胞株MDA-MB-231中SHIP2可促进CXCR4的表达以及细胞的迁移。鉴于慢性粒细胞性白血病患者绝大多数有髓外侵润的现象（主要表现为脾脏肿大）我们在检测SHIP2的同时对慢粒病人进行了CXCR4的检测，以明确其与慢粒及SHIP2的关系，进而了解其有无临床意义。
　　 方法：本实验研究对象包括48例慢性粒细胞白血病（chronic myelocytic leukemia，CML）患者，10名健康志愿者。其中28名为CML慢性期初治病人，10名为经过格列卫治疗的慢性期患者，10名急变期患者。用实时定量PCR的方法检测慢性粒细胞性白血病人及正常对照骨髓细胞SHIP2基因及CXCR4的表达水平。
　　 结果：
　　 1.经检测，48例CML患者Bcr/abl融合基因均为阳性，其中。b3a2型24例，b2a2型18例b2a2，b3a2混合6例。
　　 2.各组SHIP2基因的表达水平
　　 2.1在10例健康志愿者中，均表达SHIP2基因，基因表达水平范围为0.0107-0.2736，表达水平均数为0.1172±0.0701。
　　 2.2在28例CML慢性期初治病人中，均表达SHIP2基因，表达水平范围为0.0016-0.0268，平均水平为0.0166±0.0118，其表达水平与正常对照组相比差异有统计学意义，P<0.05，低于正常对照组的表达。
　　 2.3经格列卫治疗的慢性期患者均表达SHIP2基因，基因表达水平范围为0.0107-0.0560，表达水平均数为0.0314±0.0187。其表达水平与正常对照组相比差异有统计学意义，P<0.05，低于正常对照组的表达。其表达水平与初治组相比差异有统计学意义，P<0.05，高于其表达水平。
　　 2.410例急变期患者中均表达SHIP2基因，表达水平范围为0.0041-0.1782，表达水平均数为0.0094±0.0060。其表达水平与正常对照组相比差异有统计学意义，P<0.05，低于正常对照组的表达。表达水平与初治组相比差异有统计学意义，P<0.05，低于其表达水平。
　　 3.各组CXCR4的表达水平。
　　 3.1在10例健康志愿者中，3例表达CXCR4基因，基因表达水平范围为0.-0.02736，表达水平均数为0.0132
　　 3.2在28例CML慢性期初治病人细胞中，均表达CXCR4基因，基因表达水平范围为0.005586-0.046844，平均水平为0.097571±0.040272，其表达水平与正常对照组相比差异有统计学意义，P<0.05，高于正常对照组的表达。
　　 3.310例急变期患者中均表达CXCR4基因，表达水平范围为0.105479-0.287813，表达水平均数为0.185235±0.049900。其表达水平与正常对照组相比差异有统计学意义，P<0.05，高于正常对照组的表达。其表达水平与初治组相比差异有统计学意义，P<0.05，高于其表达水平。
　　 4.SHIP2与CXCR4表达水平呈负相关（直线相关分析，r=-0.719，P<0.05）。
　　 结论：
　　 1.慢性粒细胞性白血病人细胞SHIP2基因的表达低于正常人，提示SHIP2基因与慢性粒细胞性白血病的发生有关。
　　 2.经格列卫治疗的慢性期病人细胞SHIP2基因表达高于初治组，说明酪氨酸激酶抑制剂可以使SHIP2基因表达提高，推测提示Bcr/abl融合基因可能抑制了SHIP2基因的表达。
　　 3.急变期患者细胞SHIP2基因表达低于初治组，提示SHIP2基因与CML的进展有关。
　　 4.SHIP2基因可做为格列卫治疗效果的评价因素及判断CML患者预后的因素之一。
　　 5.慢性粒细胞性白血病慢性期病人细胞CXCR4表达高于正常人，急变期高于慢性期，推测CXCR4参与了CML的发生及进展。
　　 6.SHIP2与CXCR4表达水平呈负性相关，推测SHIP2表达减低可能引起CXCR4水平增高，促进细胞侵润进而促进了CML的发生发展。

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材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述：PI3K/AKT途径及其负性调节因子SHIP基因家族与慢性粒细胞性白血病发生发展的关系

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