不同剂量异丙酚对防止大鼠皮瓣缺血再灌注损伤的实验研究

摘要

目的：本研究通过对大鼠腹腔注射异丙酚，观察其对大鼠岛状皮瓣缺血再灌注(ischemia-reperfusion，I/R)后组织学变化和成活面积的影响，以证实异丙酚在防止皮瓣缺血再灌注的作用，为提高皮瓣移植成活率，探索新的有效方法。并通过定量检测皮瓣中的核转录因子κB(nuclear factor-kappaB，NF-κB)和内皮细胞的细胞间粘附分子1(intercellular adhesionmolecule1，ICAM-1)，初步探讨其对防止皮瓣缺血再灌注的作用机制，为其更广泛的应用临床提供可靠的实验依据。
　　 方法：选健康Wistar大鼠80只，雌雄不限，随机分为四组，每组20只。P0组为对照组，P50组为异丙酚50mg/kg组，P100组为异丙酚100mg/kg组，P150组为异丙酚150mg/kg组，模型制作前分别向四组大鼠腹腔注射生理盐水和异丙酚50mg/kg、100mg/kg、150mg/kg。参照Manson等的方法制备大小为3cm×7cm以腹壁浅血管为蒂的岛状皮瓣缺血再灌注模型。夹闭血管分支近端的股动脉，结扎分支远端的股动脉。持续缺血10h取出动脉夹再通股动脉。分别于掀起皮瓣即刻、I/R2h、I/R8h和I/R24h留取标本，比色法检测皮瓣组织中丙二醛(Malondialdehyde，MDA)和髓过氧化物酶(Myeloper3xidase，MPO)的含量，免疫组化法检测皮瓣组织中ICAM-1和NF-κB的表达，7天后测量皮瓣成活率。所有数据应用SAS8.0软件进行处理。组间均数差异性比较采用单因素方差分析(oneway ANOVA)，有显著差异者用最小显著差异法(LSD)进行两两比较，双变量相关分析采用直线相关性分析。以P＜0.05为具有显著性差异。
　　 结果：
　　 1、皮瓣大体观察：
　　 术后7d，各实验组皮瓣近段颜色淡红，弹性较好，并可见少量毛发生长。对照组中段和远段颜色棕黑色，弹性明显下降，表面有褐色结痂；原位掀起皮瓣时见皮瓣出血较少，肉膜层呈紫黑色，肉膜下淡红色渗出液较多。P50组皮瓣中段颜色逐渐变暗，表面有少量褐色痂壳形成，无毛发生长，弹性减退，远段呈黑褐色，弹性明显下降，原位掀起皮瓣时见肉膜层呈暗红色，肉膜层下可见少量新鲜出血及少量淡红色渗出液。P100组和P150组皮瓣成活情况相近，中段颜色淡红，有少量毛发生长，远端和部分边缘区呈黑褐色并有痂壳覆盖，弹性较差，原位掀起皮瓣时见皮瓣出血活跃，出血量较多，肉膜层颜色淡红，肉膜下无积血积液。
　　 根据大体观察结果，各组皮瓣近段成活情况均好于中远段，各实验组皮瓣中远段成活情况均明显好于对照组。
　　 2、皮瓣成活率：
　　 P150组(68.9±7.2)％＞P100组（68.0±6.7）％＞P50组（52.9±6.7）％＞对照组(42.5±5.1)％，皮瓣成活面积实验组与对照组比较均有显著性差异(F=78.52，P＜0.01)；两两比较，P150组与P100组组间无显著性差异(P＞0.05)，其它各组间两两比较均有显著性差异(P＜0.01)。
　　 3、实验室检测结果：
　　 3.1、HE染色光镜组织学观察：
　　 术后7d，对照组：表皮、真皮及肉膜层完全坏死，结构混乱不清，皮下可见大量的中性粒细胞浸润。小剂量组：局限性表皮萎缩、变薄，真皮层细胞排列紊乱，皮下组织水肿，血管扩张；中性粒细胞浸润明显。中高剂量组：皮肤各层结构无明显改变，皮下组织轻度水肿，血管周围可见散在的局灶性中性粒细胞浸润。
　　 3.2、MDA检测结果：
　　 I/R前皮瓣组织MDA含量均在2.25nmol/mgp左右，I/R后MDA的含量随时间延长而逐渐升高，I/R24h达高峰，四组MDA含量比较有显著性差异(F=137.65，P＜0.01)。各实验组与对照组比较MDA含量明显下降，差异有统计学意义(P＜0.01)；中、高剂量组低于低剂量组(P＜0.05)，但中、高剂量组之间比较无显著性差异(P＞0.05)。
　　 3.3、MPO检测结果：
　　 I/R前皮瓣组织MPO含量均在0.41U/g左右，I/R后MDA的含量随时间延长而逐渐升高，I/R24h达高峰，四组MDA含量比较有显著性差异(F=81.73，P＜0.01)。各实验组与对照组比较MPO含量下降明显，差异有统计学意义(P＜0.01)；中、高剂量组低于低剂量组(P＜0.05)，但中、高剂量组之间比较无显著性差异(P＞0.05)。
　　 3.4、ICAM-1免疫组化染色结果：
　　 ICAM-1阳性表达主要位于中性粒细胞和血管内皮细胞的胞浆内，I/R2hICAM-1表达量极少，I/R8h显著升高，I/R24h非常显著升高，四组比较有显著性差异(F=53.71，P＜0.01)。各实验组与对照组比较ICAM-1表达量明显降低，有显著性差异(P＜0.05)；实验组内比较中、高剂量组明显低于低剂量组(P＜0.05)；而中、高剂量组之间比较无显著性差异(P＞0.05)。
　　 3.5、NF-κB免疫组化染色结果：
　　 NF-κB阳性表达主要位于中性粒细胞和血管内皮细胞的胞浆内，强阳性者细胞核内也有表达。对照组于I/R2h达高峰，而实验组延迟到I/R8h表达最高，四组间表达峰值比较有显著性差异(F=38.26，P＜0.01)。各实验组与对照组比较NF-κB表达量明显降低，有显著性差异(P＜0.05)；中、高剂量组明显低于低剂量组(P＜0.05)，而中、高剂量组之间比较无显著性差异(P＞0.05)。I/R24h，各组之间表达量均明显下降，各组之间比较无显著性差异(P＞0.05)。
　　 3.6、NF-κB和ICAM-1表达的相关性：
　　 各组皮瓣中NF-κB和ICAM-1表达均呈正相关，P0组(r=0.6066,P＜0.01),P50组(r=0.4876,P＜0.05),P100组(r=0.5632,P＜0.05),P150组(r=0.5955,P＜0.01)。
　　 结论：
　　 1、NF-κB的活化与ICAM-1的诱生在皮瓣缺血再灌注损伤的病理过程中起着重要作用，二者关系密切。
　　 2、异丙酚可能通过抑制缺血皮瓣组织的脂质过氧化反应、清除自由基、降低炎性因子表达等作用机制抑制NF-κB的表达与活化，继而下调ICAM-1的表达，减少中性粒细胞的黏附、聚集和释放氧自由基，从而对皮瓣缺血再灌注损伤起保护作用。
　　 3、大鼠腹腔应用异丙酚的最佳剂量为100-150mg/Kg。

目录

文摘

英文文摘

不同剂量异丙酚对防止大鼠皮瓣缺血再灌注损伤的实验研究

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 异丙酚与皮瓣缺血再灌注的研究现状

参考文献

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