17β-雌二醇对体外培养的盆底功能障碍性疾病患者阴道壁成纤维细胞应力前后的影响

摘要

目的:研究雌激素在体外培养PFD(pelvic floor dysfunction)患者的阴道壁成纤维细胞应力前后胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ)、胶原蛋白Ⅲ(CollagenⅢ)、类赖氨酰氧化酶1lysyl oxidase like1(LOXL1)和纤维粘连蛋白fibrinectin(FN)表达的差异,探讨其在PFD发病中的作用。
　　 方法:
　　 1、研究对象:选取2009年10月至2010年-9月,在河北医科大学第二医院妇科接受手术治疗的女性PFD患者12例的阴道壁组织。平均年龄为(58.3±9.6)岁,均为绝经后妇女。所有患者均按国际尿控协会(intemational continence society)1996年公布POP-Q(the pelvic organprolal quantitative examination)进行量化分期,所有患者临床至少有一个部位脱垂为Ⅲ～Ⅳ度。术前3个月内均未使用过激素类药物,均不合并结缔组织性等疾病,所取组织均经患者同意。
　　 2、成纤维细胞培养:采用组织块法和酶消化法进行阴道壁成纤维细胞的原代培养,取3～5代稳定的传代成纤维细胞进行实验。MTT法测定细胞增殖率。
　　 3、成纤维细胞应力:应用Flexcercell4000柔性基底拉伸系统给细胞应力,应力后用不同浓度的17-β雌二醇继续培养48小时,不加力不加药组为对照组。
　　 4、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR):提取各组细胞的mRNA,进行RT-PCR,电泳照相并记录各观察指标在各组中的表达结果。
　　 结果:
　　 1、细胞培养情况原代培养成功后,采用1:2比例进行传代分瓶。免疫组织化学方法进行鉴定,波形蛋白阳性、角蛋白、肌动蛋白阴性的鉴定为成纤维细胞。
　　 2、细胞增殖情况应力前的阴道壁成纤维细胞在由低到高浓度17-β雌二醇作用下的增殖率分别为0.23、0.38、0.38、0.54。应力后分别为0.06、0.07、0.10、0.17、两者比较有统计学意义(P＜0.05)。而且增殖率随药物浓度增大呈上升趋势。
　　 3、应力前、后各因子的表达情况①CollagenⅠ的表达分别为1.1872±0.0733,1.5035±0.0733,二者比较有统计学意义(P＜0.05)。②CollagenⅢ的表达分别为0.7229±0.0966,0.2024±0.0465,二者比较有统计学意义(P＜0.05)。③LOXL-1的表达分别为0.7724±0.1873,1.0855±0.0805,二者比较有统计学意义(P＜0.05)。④FN的表达分别为0.4290±0.1168,0.4215±0.0830,二者比较无统计学意义(P＞0.05)。
　　 4、高药理浓度的17-β雌二醇作用下,CollagenⅠ、CollagenⅢ、LOXL-1、FN的表达分别为:3.0809±0.1862、1.3032±0.2994、1.5863±0.3241、1.1418±1.0030。与其他组相比有统计学意义(P＜0.05)。
　　 结论:
　　 1、应力对体外培养PFD患者的阴道壁成纤维细胞的增殖有抑制作用,17-β雌二醇有促进作用,且细胞增殖率随药物浓度的增加而上升;17-β雌二醇能在一定程度上反转应力对细胞增殖能力的抑制作用。
　　 2、体外培养的PFD患者阴道壁成纤维细胞,在应力后细胞外基质成分CollagenⅠ、LOXL-1的表达上升而CollagenⅢ的表达下降,FN无明显变化。17-β雌二醇使应力后细胞合成细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)成分增加。
　　 3、应力和雌激素在PFD的发病机制中可能起了比较重要的作用。

目录

文摘

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前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 雌激素治疗PFD现状及对胶原代谢的影响

致谢

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