贲门腺癌MBD4基因启动子区甲基化与HMLH1蛋白表达的关系

摘要

目的:贲门腺癌(gastric cardiac adenocarcinoma,GCA)按1991年发布的中国贲门腺癌的界定标准,瘤体发生在胃体上端的齿状线以上的多为食管鳞状细胞癌,瘤体发生在齿状线下约2.0 cm的多为贲门腺癌,二者中间发生的肿瘤为交界处瘤。由于贲门腺癌和一般的胃体癌都是腺癌,医学界一直以来将二者作为同一种肿瘤.胃癌来研究。随着医学科学技术的进展,我们逐渐认识到,贲门腺癌和胃体腺癌从诊断,检查,治疗和预后等不同方面都有诸多不同。自从独立于胃癌以来,贲门腺癌得到了医学界越来越多的重视和研究。近些年来,对贲门腺癌的研究已取得很大进展。虽然我们对贲门腺癌已实施了很多干预措施,但是因为贲门腺癌发病比较隐蔽,出现症状时已是中晚期,治疗效果较差。为降低贲门腺癌的发病率和死亡率就应对其发病的机制进行更进一步深入的研究。
　　 近年来我们在实际生活中面临着诸多用经典遗传学的中心法则难于和无法解释的遗传现象,在深入的研究下,科学工作者发现,在不涉及基因碱基对改变的前提下,某个碱基的某个位点的基团修饰同样可以影响遗传信息的转录和相应蛋白质的翻译表达。这就是表观遗传学所涉及的范畴。如今,以DNA甲基化为代表的表观遗传学改变已经成为肿瘤发病机制研究的一个热点而被学界广泛关注。本项研究通过检测甲基化CpG结合域蛋白4(Methyl-CpG Binding Domain Protein4,MBD4)基因在贲门腺癌及癌旁非肿瘤组织中的甲基化情况与HMLHl蛋白表达的关系,探讨基因甲基化和贲门腺癌的发生,转移和分化程度之间的关系,从而为贲门腺癌的发病机制,基因治疗及临床预后等方面提供新的理论和试验依据。
　　 方法:
　　 1应用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)技术检测77例贲门腺癌组织,46例癌旁非肿瘤组织中MBD4基因的甲基化情况。
　　 2应用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcriptase PCR,RT-PCR)法检测36例癌组织和26例癌旁组织中MBD4基因的mRNA表达情况。
　　 3应用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)S-P法检测30例贲门腺癌组织及25例相应癌旁非肿瘤组织中HMLHl蛋白的表达情况。
　　 4运用统计软件SPSS13.0对数据进行统计学分析。
　　 结果:
　　 1 MBD4基因甲基化与临床病理学资料的关系
　　 MBD4基因在贲门腺癌组和癌旁非肿瘤组的甲基化率分别为59.7％(46/77)和19.6％(9/46),贲门腺癌组的甲基化率显著高于癌旁非肿瘤组(x2=18.802 P=0.000),差异有统计学意义。
　　 在有组织HE资料的73例标本中,正常粘膜23例,癌前病变(包括ⅠⅡⅢ级)12例,癌38例,其甲基化率分别为4.3％(1/23),50％(6/12),71％(27/38)。对于正常粘膜和非典型增生组,其差异有统计学意义(P=0.003)但是对于非典型增生组和癌组,差异没有统计学意义(x2=1.584P=0.208)。
　　 MBD4基因启动子甲基化与患者的年龄(P=0.209),性别(P=0.827),肿瘤TNM分期(P=1.000),分化程度(P=0.893)及有无淋巴结转移(P=0.671)无关。
　　 2 MBD4基因mRNA的表达与临床病理学资料的关系
　　 有mRNA资料的36例癌组织标本中,MBD4基因mRNA表达量与年龄(P=0.631),性别(P=0.393),肿瘤TNM分期(P=0.230),肿瘤分化程度(P=0.842),淋巴结转移情况(P=0.660)临床病理学资料之间关系无统计学意义。
　　 3 MBD4基因甲基化与mRNA表达的关系
　　 贲门腺癌组织MBD4 mRNA的表达量(0.618±0.472),明显低于癌旁非肿瘤组织的表达(0.990±0.698),差异有统计学意义(t=-2.509 P=0.015)。
　　 有mRNA资料的36贲门腺癌组织中,发生甲基化的24例和未发生甲基化的12例mRNA平均表达水平分别为(0.537±0.440)和(0.819±0.506),前者小于后者,但二者差异无统计学意义(t-=-1.656 P=0.107)。
　　 4 HMLH1蛋白在癌组织和癌旁非瘤组织中表达的关系
　　 对于30例贲门腺癌组织和25例癌旁非肿瘤组织,HMLH1在前者中表达率为20％(6/30),远远低于其在后者中的表达率84％(21/25),且二者差异有显著的统计学意义(X2=22.349 P=0.000)。
　　 5 HMLH1蛋白表达与MBD4基因甲基化的关系
　　 MBD4甲基化阳性组的HMLH1蛋白表达阳性率为32％(9/28),MBD4甲基化阴性组的HMLH1蛋白表达阳性率为69％(18/26),二者差异有统计学意义(P=0.007),Pearson卡方检验相关系数R=-0.371,22=7.280,提示HMLH1蛋白表达与MBD4基因甲基化二者具有负向关联性。
　　 6 HMLH1蛋白表达与MBD4基因mRNA表达的关系
　　 HMLH1蛋白表达阳性组的MBD4基因mRNA平均表达量为(0.533±0.475),HMLH1蛋白表达阴性组的MBD4基因mRNA平均表达量为(0.627±0.484),二者差异不具有统计学意义(P=0.676)。
　　 结论:
　　 1错配修复基因MBD4启动子区甲基化可能是导致贲门腺癌形成的原因之一。MBD4基因甲基化可能参与肿瘤发生的早期过程。
　　 2错配修复基因MBD4启动子区甲基化情况与患者年龄,性别等因素无关,与肿瘤的分期,分化程度及淋巴结转移等生物学行为亦无关。
　　 3 HMLH1蛋白表达降低可能与贲门腺癌发生有关。
　　 4在贲门腺癌中,MBD4基因高甲基化可能是HMIH1蛋白低表达的原因之一。

目录

文摘

英文文摘

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 MBD4及其家族MeCPs的研究进展

致谢

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