沙利度胺对肺纤维化大鼠细胞间黏附分子、转化生长因子表达的影响

摘要

目的:肺间质纤维化（pumlonaryinterstitialfibrosis）是指原因不明并以普通型间质性肺炎（UIP）为特征性病理改变的一种慢性炎症性间质性肺疾病，是特发性间质性肺炎中最常见的类型。至今尚无有效治疗药物，中位生存期＜3年。以X线胸片改变及肺功能损害的异质性疾病的总称，以弥漫性的肺泡炎、肺实质炎症和间质纤维化为病理特点。致肺纤维化的肺损伤的发生的始动因素目前还不清楚，一些人认为可能与病毒感染、遗传易感性、免疫功能的异常等有关。各种因素损伤毛细血管内皮细胞和肺泡上皮细胞，导致肺泡巨噬细胞的（AM）活化，中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞等炎症细胞的浸润，炎症细胞和其释放的炎症递质和细胞因子介导了早期肺损伤。肺间质纤维化传统的治疗包括:肾上腺糖皮质激素（简称激素）治疗、免疫抑制剂和抗纤维化制剂单独或与激素联合治疗等。沙利度胺最早作为一种镇静剂和止痛剂，后来发现其具有免疫调节和抗炎作用。90年代，研究发现沙利度胺能够较为特异地调节大鼠TNF-α的水平，降低TNF-α，IL-6和IL-10mRNA的水平，从而抑制肺纤维化的进程。
　　 本实验旨在研究沙利度胺对博来霉素致大鼠纤维化的干预作用。通过测量血清中ICAM-1、TGF-β1的表达水平探讨可能的作用机制。
　　 方法:选取清洁及健康、雄性SD大鼠(由河北医科大学实验动物中心提供)72只，体重250-300g，先进行适应性饲养（时间为一周），之后随机分为:(1)正常对照组（A组）:18只，将0.9％Nacl溶液按照0.1ml/100g的方法注入气管内，并用0.9％Nacl溶液按照1ml/100g的方法灌胃（时间从假造模后第1日开始），1次/天，并分别在7天、14天、28天各处死6只，(2)模型组（B组博来霉素组）:18只大鼠，一次性用注射器将博来霉素A5(5mg/kg)均匀的注入气管内，并用0.9％Nacl溶液1ml/100g灌胃（时间从造模后第一日开始），1次/天，分别于7天、14天、28天分别处死6只。(3)沙利度胺干预组（C组）:大鼠18只，将博来霉素A5(5mg/kg)用注射器均匀的、一次性的注射入气管，并于造成模型后第1天用1％的沙利度胺溶液（沙利度胺与0.9％Nacl溶液按比例配成）按照100mg/kg的方法灌胃，1次/天，分别于7天、14天、28天均处死6只。(4)地塞米松组干预组（D组）:大鼠18只，将博来霉素A5(5mg/kg)均匀的、一次性的向气管内注入，并从造成模型后第1天开始将地塞米松按照0.3mg/100g/d的方法腹腔内注射，分别在7天、14天、28天各处死6只。各组将双侧股动脉分离，注意尽量减少对股动脉的刺激，将股动脉游离后，用剪刀剪断双侧股动脉，将血放净，大鼠也同时被处死，取右肺上叶固定于4％多聚甲醛溶液中，用免疫组化法检测ICAM-1、及TGF-β1并用图像分析系统测量并记录阳性细胞计数及免疫组化评分(IOD)值。采用HE染色及Masson染色的方法来对各个组大鼠肺组织的肺泡炎程度及纤维化的发展程度进行评价，同时按Szapiel[7-8]法进行分级，可分为4级。用SPSS13.0统计软件对各个组数据进行分析。
　　 结果:
　　 1、肺组织病理分析结果:在同一时间点，博来霉素组肺泡炎程度明显高于对照组(P＜0.05)，博来霉素组肺纤维化程度亦显著高于对照组，7天时(P＞0.05)，14天、28天时(P＜0.05)，表明动物模型复制成功。沙利度胺组肺泡炎程度情况:7天、14天沙利度胺组肺泡炎程度较博来霉素组明显减轻（P＜0.05），28天时正常对照组和模型组肺泡炎程度无差别(P＞0.05)。纤维化程度:7天时正常对照组和模型组无差别(P＞0.05)，14天和28天时两组均较正常对照组严重(P＜0.05)，14天时(P＞0.05)与模型组无差别，28天时(P＜0.05)较模型组纤维化程度减轻。地塞米松组肺泡炎情况:7天、14天较正常对照组重，较模型组轻(P＜0.05)，28天时与正常对照组和模型组比较无差别(P＞0.05)，纤维化程度:7天时较正常对照组和模型组无差异(P＞0.05)，14天时较对照组程度加重(P＜0.05)，较模型组无差异(P＞0.05)，28天时较对照组无差异(P＞0.05)，较模型组减轻(P＜0.05)。在同一时间点，沙利度胺组与地塞米松的肺泡炎和纤维化程度均无统计学意义(P＞0.05)。
　　 2、肺组织胶原蛋白的含量变化（IOD表示）:造模组大鼠肺组织Ⅲ型胶原蛋白的含量随着造模时间的延长逐渐增高，28天达最高值，7天、14天、28天与对照组比较有统计学意义(P＜0.05);沙利度胺组和地塞米松组大鼠Ⅲ型胶原蛋白含量呈缓慢增长趋势，与模型组相比含量均较低(P＜0.05);但地塞米松组7天、沙利度胺组7天之间无统计学意义(P＞0.05)，14天、28天沙利度胺组Ⅲ型胶原蛋白含量较地塞米松组低，具有统计学意义(P＜0.05)。
　　 3、血清中ICAM-1、TGF-β1含量变化
　　 模型组大鼠血清TGF-β1含量均显著高于其他三组，差异有统计学意义(P＜0.05)，地塞米松组与沙利度胺组相比在7天、14天具有统计学意义(P＜0.05)，在28天时无统计学意义(P＞0.05)。
　　 模型组大鼠血清中ICAM-1含量逐渐增高，至28天达到最大值，在相同时间点含量均高于正常对照组、地塞米松组和沙利度胺组。地塞米松组和沙利度胺组在7天、14天时差异具有统计学意义，(P＜0.05)，在28天时无统计学意义(P＞0.05)。
　　 结论:
　　 1、在博莱霉素诱导的大鼠肺间质纤维化模型中，沙利度胺能够减少肺间质内的胶原沉积，对于肺间质纤维化具有一定治疗作用。
　　 2、在博莱霉素诱导的SD大鼠肺纤维化模型中，沙利度胺具有与地塞米松类似的抗纤维化作用，其机制可能与通过抑制细胞因子ICAM-1及TGF-β1的表达有关，以此减轻早期肺泡炎和纤维化程度，最终抑制肺间质纤维化的进程。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

3 观察指标及方法

4 统计方法

结果

1 动物一般情况

2 肺组织病理学改变

3 肺组织Ⅲ型胶原蛋白的表达

4 血清中TGF-β1，ICAM-1含量变化

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 肺纤维化与沙利度胺

致谢

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