北京某医院鲍曼不动杆菌临床分离株耐药性及分子流行病学的研究

摘要

目的:鲍曼不动杆菌(Acinetobacterbaumannii)是一种革兰阴性非发酵菌，广泛存在于医院环境中，如医护人员手部、呼吸机设备、患者用具、透析机、消毒液，甚至水龙头等，是最常见的条件致病菌之一;该菌可以导致多种医院感染，如伤口感染、肺炎、败血症和脑膜炎等。近几年随着抗菌药物的广泛应用，鲍曼不动杆菌耐药株逐年增加，并从对单一抗菌药耐药向多重耐药、由低耐药向高耐药发展。尤其是多重耐药鲍曼不动杆菌的出现，为抗感染疾病的有效治疗提出了严峻的挑战，因此对鲍曼不动杆菌耐药机制及流行病学研究已成为国内外的热点。本次研究采用多位点序列分型(Multilocussequencetyping，MLST)，多重PCR(multiplexpolymerasechainreaction，M-PCR)对菌株的部分耐药机制、群体遗传学结构及菌株变异情况进行研究，期待为鲍曼不动杆菌的流行病调查提供新的数据。
　　 方法:2002到2009年期间收集北京某三甲医院不同科室，不同时期患者的不同标本分离得到的多重耐药鲍曼不动杆菌341株。首先，对所有菌株采用苯酚-氯仿提取方法提取基因组DNA;然后，应用多重PCR方法鉴定导致鲍曼不动杆菌碳青霉烯类耐药的主要相关基因，OXA23型、OXA58型、OXA69型、OXA143型、OXA51型和OXA24型;最后，采用MLST对341株分离株的7个等位基因进行分析，获得各个分离株的等位基因谱(allelicprofile)和序列型(sequencetype，ST)。随后以ST型和等位基因谱为基础，利用Bionumerics6.6、START2.0、RDP3.0、MEGA和eBURST等软件对鲍曼不动杆菌的群体遗传学结构进行深入分析。
　　 结果:341株测试菌株中，blaOXA-51-like基因携带率为97.95％，与初始鉴定不符率是2.05％。多重PCR发现了18种耐药基因组合，其中以blaOXA-51-like+blaOXA-23-like+blaOXA69+blaISF-R+blaISF-OXA23R组合为主(n=262，76.83％)，且blaOXA-23-like、blaISAbal的检出率分别是89.44％，99.41％。但是本次实验未发现blaOXA-24-like、blaOXA-58-like、blaOXA-143-like阳性菌株。多重耐药鲍曼不动杆菌全基因组具有非常丰富的插入序列ISAbal，位于blaOXA-23-like、blaOXA-51-like等耐药基因的上游。文献报道插入片段位于blaOXA-23-like或blaOXA-51-like前端，但在本次研究中发现了blaISAbalF-OXA23及blaISAbalF-OXA51同时存在的情况。341株菌中MLST的成功扩增并测序率是97.95％，利用Bionumerics6.6对这334株菌株序列进行分析，确定了4个ST，其中2个为新ST型。多重耐药鲍曼不动杆菌主要流行克隆株的等位基因谱为ST2(2-2-2-2-2-2-2)，与世界上很多国家流行的携带blaOXA-23-like菌株的ST一致。本次研究中ST及其分布如下:ST-2(97.9％)、ST-113(0.9％)、ST-185(0.9％)和ST-187(0.3％)。首次发现了等位基因rpoB-42，rpoB-43和新序列型ST-185，ST-187。利用eBURST软件分析得到ST2、ST185、ST187属于克隆群1(ClonalComplex1，CC(1))，而ST113属于克隆群8;通过START2.0得到(I)SA的值为0.1436(P＜0.0001)，提示连锁不平衡并存在重组事件;RDP3.0分析得出pyrG、cpn60、fusA、gltA、rplB、recA均有重组发生，共计10个重组事件。
　　 结论:341株多重耐药鲍曼不动杆菌blaOXA-51-like基因携带率达到97.95％，以blaOXA-51-like+blaOXA-23-like+blaOXA69+blaISF-R+blaISF-OXA23R组合为主(n=262，76.83％)。本次研究所调查医院的多重耐药鲍曼不动杆菌以ST2为主，该菌的种群内存在频繁的重组，但是等位基因型依旧保持连锁不平衡的特征，属于典型的Epidemic种群结构。

目录

声明

摘要

引言

第一部分 应用多重PCR方法分析碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌的部分耐药机制

前言

材料和方法

结果

附图

附表

讨论

小结

第二部分 应用MLST技术鉴定多重耐药鲍曼不动杆菌的主要流行克隆谱系

前言

材料及方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

结论

综述

致谢

个人简历