基于LXRs信号转导途径探讨泽泻防治高脂血症的作用机制

摘要

目的:通过动物实验，观察泽泻汤对高脂血症大鼠血清中胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量的影响，以及对肝X受体仅（LXRα）mRNA及其下游基因胆固醇7α羟化酶(CYP7A1)mRNA和ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)蛋白表达的影响，探讨泽泻汤对高脂血症的治疗作用及其可能的作用机制。
　　 方法:选用雄性SD大鼠50只，体重160-180g。大鼠自由饮水进食，饲养于18-22℃明暗各12小时的清洁级动物实验室内。适应性喂养一周后，按体重分层随机分为5组，每组10只。具体分组情况如下:正常对照组（简称正常组）、模型对照组（简称模型组）、泽泻汤高剂量组（简称高剂量组）、泽泻汤低剂量组（简称低剂量组）、阳性药血脂康对照组（简称对照组）。采用喂饲高脂饲料的方法复制大鼠高脂血症模型，共造模4周。造模的同时，各用药组灌服治疗药或对照药，正常组与模型组灌服等量的生理盐水，每天灌胃一次，每次给药量均按1ml/100g计算。于最后一次给药后禁食不禁水12h，麻醉状态下股动脉取血，将血样离心，分离血清，检测血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C的含量。同时迅速剖取肝脏，取肝右叶的部分肝组织，-70℃冰箱冷冻，以备RT-PCR法检测LXRαmRNA和CYP7A1mRNA的表达变化。并取适宜大小的肝组织和小肠组织置于4％多聚甲醛液中固定，以备运用免疫组织化学方法观察ABCA1蛋白的表达变化，并运用HE染色法观察肝组织形态学的变化。
　　 结果:
　　 1、各组大鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C的含量变化
　　 模型组大鼠血清TC、TG、LDL-C的含量(4.55±0.42，2.58±0.29，2.93±0.31)比正常组(1.78±0.21，0.79±0.08，0.67±0.09)均明显升高(P＜0.01)，HDL-C含量(0.42±0.05)比正常组(0.84±0.08)明显降低（P＜0.01），说明大鼠出现明显的血脂异常，显示造模成功。经药物干预后，各用药组均能明显降低大鼠TC、TG、LDL-C的含量，并升高HDL-C的含量（P＜0.01）。其中阳性对照组和高剂量组的TC含量(2.32±0.39，2.23±0.30)明显低于低剂量组(3.35±0.26)(P＜0.01)，阳性对照组的TC含量与高剂量组比较无显著性差异(P＞0.05）;高、低剂量组的TG含量(1.24±0.11，1.70±0.20)均高于阳性对照组(1.17±0.12)(P＜0.01)，低剂量组的TG含量亦高于高剂量组(P＜0.01);各给药组之间的HDL-C含量(0.71±0.08，0.69±0.07，0.75±0.10)比较均无显著差异（P＞0.05）;低剂量组的LDL-C含量(1.82±0.21)明显高于阳性对照组和高剂量组(1.11±0.17，1.13±0.19)(P＜0.01)，阳性对照组与高剂量组之间LDL-C含量比较无显著差异（P＞0.05）。
　　 2、各组大鼠肝组织形态学的变化
　　 正常组大鼠肝小叶和肝血窦结构清晰，肝细胞排列整齐，围绕中央静脉呈放射状，细胞核形态正常，胞浆均匀。模型组大鼠肝细胞排列紊乱，脂肪变性明显，细胞形状不规则，大小不一致，多数胞浆中可见大小不等、数目众多的脂肪滴，细胞核偏离正常位置。与模型组比较，各治疗组大鼠肝细胞脂肪空泡和脂滴数量显著减少，肝小叶和肝血窦结构比较清晰，脂肪变性程度均有明显改善。
　　 3、各组大鼠肝组织LXRαmRNA的表达变化
　　 模型组大鼠肝组织LXRαmRNA的表达(0.369±0.030)明显低于正常组(0.634±0.039)(P＜0.01);经药物干预后，各用药组LXRαmRNA的表达均高于模型组(P＜0.01);其中，阳性对照组的LXRαmRNA表达(0.563±0.038)明显低于高、低剂量组(0.677±0.060，0.668±0.039)(P＜0.01)，高、低剂量组的LXRαmRNA表达无显著差异（P＞0.05）。
　　 4、各组大鼠肝组织CYP7AlmRNA的表达变化
　　 模型组大鼠肝组织CYP7AlmRNA的表达(0.316±0.042)明显低于正常组(0.767±0.031)(P＜0.01);经药物干预后，各用药组CYP7A1mRNA的表达均高于模型组(P＜0.01);其中，阳性药对照组的CYP7A1mRNA表达(0.492±0.025)明显低于高、低剂量组(0.645±0.029，0.624±0.018)(P＜0.01)，高、低剂量组的CYP7A1mRNA表达无显著差异（P＞0.05）。
　　 5、各组大鼠肝组织中ABCA1表达的变化
　　 光镜下可见，ABCA1在大鼠肝细胞胞浆中表达，呈黄棕色。正常组表达广泛，黄棕色颗粒密布，染色较深;模型组呈散在表达，染色较浅。经药物干预后，各用药组大鼠肝组织中呈黄染颗粒的阳性细胞明显增多，染色均有不同程度加深。
　　 半定量分析结果显示，模型组大鼠肝组织中ABCA1蛋白表达量(0.120±0.019)比正常组(0.323±0.031)明显降低(P＜0.01)，经药物干预后，各用药组均能显著升高肝组织ABCA1的蛋白表达量（P＜0.01）。其中，高、低剂量组的肝组织ABCA1的蛋白表达量(0.390±0.032，0.377±0.043)均明显高于阳性对照组(0.288±0.030)(P＜0.01)，高、低剂量组之间比较无显著性差异（P＞0.05）。
　　 6、各组大鼠小肠组织中ABCA1表达的变化
　　 光镜下可见，ABCA1在大鼠小肠上皮细胞和巨噬细胞胞浆中表达，呈黄棕色。正常组黄棕色颗粒密布，染色较深;模型组呈散在表达，染色较浅。经药物干预后，各用药组大鼠肝组织中呈黄染颗粒的阳性细胞明显增多，染色均有不同程度加深。
　　 半定量分析结果显示，模型组大鼠小肠组织中ABCA1蛋白表达(0.180±0.020)比正常组(0.426±0.016)明显降低（P＜0.01），经药物干预后，各用药组均能显著升高小肠组织ABCA1的蛋白表达量(P＜0.01)。其中，高、低剂量组(0.390±0.032，0.377±0.043)均明显高于阳性对照组(0.288±0.030)(P＜0.01)，高、低剂量组之间比较无显著性差异(P＞0.05）。
　　 结论:
　　 1、泽泻汤能降低高脂血症大鼠血清TC、TG、LDL-C的含量，升高HDL-C的含量，具有良好的调脂作用。
　　 2、泽泻汤能明显改善高脂血症大鼠肝组织脂变程度，表现为用药后肝细胞脂肪变程度减轻，脂肪空泡和脂滴数量显著减少。
　　 3、泽泻汤能上调高脂血症大鼠肝组织LXRαmRNA表达，促进脂质转运和胆固醇代谢、排泄，降低脂质在肝脏的沉积，从而达到防治高脂血症的作用。
　　 4、泽泻汤能上调高脂血症大鼠肝组织CYP7A1mRNA表达，促进胆固醇向胆汁酸转化，加强胆固醇的代谢和排泄，从而改善血脂状况。
　　 5、泽泻汤能上调高脂血症大鼠肝组织和小肠组织ABCA1蛋白表达，从而促进胆固醇的逆转运和抑制胆固醇吸收，降低胆固醇水平。

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