Th1/Th2/Th17细胞因子在活动性结核与隐性结构感染者产生的特点

摘要

目的:结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)感染是一重要的公共卫生问题，据2011年WHO公布的数据显示，每年估计有870万的新增感染病例，而每年约有140万人死于结核病。分枝杆菌感染机体后会产生一系列不同的结果，包括急性肺部结核感染、慢性开放性感染（可向肺部或其它组织播散）、隐性感染(Latent Tuberculosis Infection，LTBI)。隐性感染即已经感染结核杆菌，但尚未出现临床症状和胸片异常表现，也不具有传染性，但病原体并未完全被清除。这些隐性感染者，虽然无明显症状，但他（她）们是活动性结核的“后备军”。如果将这些隐性感染者从人群中筛选出来，进行针对性治疗，对防止其发展为活动性结核有重要意义。
　　方法:采用病例和对照研究方法进行实验设计。选取在河北省胸科医院住院的结核病患者24例作为活动性结核病例组(ATB)，选取与结核病人密切接触的护士和医生26例作为隐性感染者（LTBI）;选取在河北省人民医院进行健康体检的24例为对照。所有被纳入本项研究的人员均注射过卡介苗(BCG)。
　　取采血后6h以内的新鲜EDTA抗凝血100μl，放入24孔细胞培养板，再加入含有10％新生牛血清的RPMI-1640完全培养基900μl，和终浓度分别为100μg/ml和5μg/ml的结核菌素(PPD)和植物凝集素(PHA)，充分混匀，在37℃含饱和水汽、5％的CO2培养箱中连续培养7d。然后收集培养上清，-80℃保存备用。采用流式液相多重蛋白定量检测技术(CytometricBead Array,CBA)测定培养上清中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ和IL-17A的水平，并通过统计学方法分析这些细胞因子在隐性结核感染中的诊断价值。
　　结果:
　　1本研究选取的24例活动性结核病例，26例隐性结核感染者，24例为健康对照者，均为女性，年龄26.44±7.53岁。三组年龄比较，差异无统计学意义。
　　2活动性结核组的Th1型细胞因子产生明显减少。其中正常对照组、隐性感染组及活动性结核组的外周血培养上清中IFN-γ分别为964.70±697.73(pg/mL)、1083.19±754.55(pg/mL)、584.07±318.19(pg/mL),活动性结核组显著低于健康对照和隐性感染组（P=0.039，P=0.001），健康对照和隐性感染组间未见显著性差异(P=0.169)。正常对照组、隐性感染组及活动性结核组的TNF-α的水平分别为427.83±466.37(pg/mL)、433.08±382.47(pg/mL)、166.81±151.61(pg/mL)(pg/mL)，活动性结核组显著低于健康对照和隐性感染组（P=0.014，P=0.011），健康对照和隐性感染组间未见显著性差异(P=0.959)。正常对照组、隐性感染组及活动性结核组的IL-2水平分别为1469.53±744.38(pg/mL)、1166.11±703.96(pg/mL)、428.47±259.18(pg/mL)，活动性结核组显著低于健康对照和隐性感染组（P=0.001，P=0.001），健康对照和隐性感染组间未见显著性差异(P=0.083)。
　　3活动结核患者IL-4产生明显减少。正常对照组、隐性感染组及活动性结核组的外周血培养上清中IL-4分别为1.85±1.43(pg/mL)、1.77±2.16(pg/mL)和0.85±0.94(pg/mL)。与健康对照组和隐性感染组相比，活动性结核患者的IL-4产生明显降低(P=0.034，P=0.047);但健康对照组与隐性感染者的IL-4产生均没有显著差别（P=0.861）。
　　健康对照组、隐性感染组及活动性结核组IL-10的水平分别为22.25±20.97(pg/mL)、28.15±43.26(pg/mL)及24.87±27.20(pg/mL)，三个研究对象的IL-10产生未见明显差异（P值均大于0.05）。
　　4活动性结核患者IL-17A产生减少
　　正常对照组、隐性感染组及活动性结核组的外周血培养上清中IL-17A分别为1.06±1.29(pg/mL)、0.91±1.08(pg/mL)和0.09±0.16(pg/mL)。与健康对照组和隐性感染组相比，活动性结核患者的IL-17A产生明显降低(P=0.001，P=0.005);但健康对照组与隐性感染者的及IL-17A产生均没有显著差别（P=0.575）。
　　健康对照组、隐性感染组及活动性结核组IL-6的水平分别为956.93±1192.20(pg/mL),1424.32±647.32(pg/mL及1568.24±1739.70(pg/mL)，三个研究对象的IL-6产生未见明显差异（P值均大于0.05）。
　　5 IL-2/IFN-γ比值在健康对照、隐性结核感染及活动性结核患者存在差异。本实验中虽然IL-2和IFN-γ在健康对照组和隐性感染组间为见到明显差异，但观察到IL-2/IFN-γ二者的比值在三个研究对象中均有明显不同。IL-2/IFN-γ比值在健康对照、隐性感染者及活动性感染患者中分别为2.02±1.28、1.40±1.05及0.80±0.62，经统计学分析三组间均存在明显差异（P值均小于0.05）。
　　结论:
　　1活动性结核患者外周血细胞经PPD刺激后，IL-2、IFN-γ、TNF-α及IL-17A的产生均显著低于健康对照及隐性感染;这些细胞因子在健康对照及隐性感染之间未显示明显差异。
　　2 IL-2/IFN-γ比值在健康对照、隐性感染者及活动性感染患者之间均有显著性差异。

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材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 结核杆菌感染的免疫诊断研究进展

致谢

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