膀胱癌高表达基因Bmi-1、AEG-1与抑癌基因FHIT在膀胱移行细胞癌中的表达情况及相关性研究

摘要

目的:
　　基于前期我们在实验中证实了Bmi-1基因与膀胱移行细胞癌密切关系，现进一步研究该基因与星形细胞上调基因-1(AEG-1)、脆性组氨酸三联体基因(FHIT)在膀胱移行细胞癌组织中的表达情况，以及Bmi-1基因与这两种基因在膀胱移行细胞癌发生、进展中的表达情况关系，进而探讨三种基因之间的相关性，为进一步寻求它们在膀胱移行细胞癌是否存在共同作用的途径提供实验基础。
　　方法:
　　我们随机选取了2010-2014年之间具有完整临床资料的46例膀胱移行上皮癌和10例膀胱正常黏膜组织的病理标本，应用Real-TimePCR、Western-Blot和免疫组织化学染色法进行检测Bmi-1、AEG-1和FHIT蛋白表达情况。实验结果使用SPSS17.0版进行分析，Bmi-1和AEG-1、FHIT三种基因相关数据采用X2检验及T检验，来分析它们在临床TNM分期、病理分级、淋巴结转移中与膀胱癌中的表达情况以及是否存在相关的关系。然后，采用两变量之间相关性分析Person以及等级资料的相关分析方法Spearman对上述三种基因在膀胱移行上皮癌中表达的是否存在相关性。
　　结果:
　　(1)通过荧光定量PCR检测Bmi-1、AEG-1、FIHT mRNA，Real-TimePCR基因扩增，计算出在膀胱癌中相对表达量，Bmi-1、AEG-1 mRNA在对照组正常膀胱组织中低表达或无表达，FHITmRNA则出现高表达。Bmi-1、AEG-1 mRNA高表达于膀胱癌组织，分别为其在正常膀胱组织中表达量的3.77、4.177倍(P＜0.05）;在不同病理分级、有无淋巴结转移中三种基因表达mRNA情况组间有显著差异，组间差异约为1.7-1.9倍(P＜0.05），随着膀胱癌细胞的恶性程度不断增加，Bmi-1、AEG-1 mRNA的表达有也随之增加。而FHITmRNA在膀胱癌组织中出现低表达甚至无表达，为其在正常膀胱组织中的0.5倍，均有统计学意义(P＜0.05）;三种基因mRNA在病理分级组和有无淋巴结转移组中表达情况统计学有显著差异(P＜0.05），但在TMN临床分期组三种基因mRNA相对表达量无明显差异(P＞0.05)。根据三种基因在膀胱癌中的表达量，两变量之间相关性分析:Bmi-1与AEG-1相关关系r=0.902P=0.000; Bmi-1与FHIT相关关系r=-0.843 P=0.03; FHIT与AEG-1相关关系r=-0.888P=0.0021。
　　(2) Western-blot检测Bmi-1、AEG-1、FIHT蛋白情况。Bmi-1、AEG-1蛋白表达在膀胱癌组织中显著上调，且在病理分级组与淋巴结转移组中随恶性程度加重三种蛋白上调并呈逐渐增强的趋势;FHIT蛋白随Bmi-1、AEG-1表达上调明显下降甚至缺失，而在TNM临床分期组中Bmi-1、AEG-1表达上调，表达程度是呈逐渐增高的趋势，FHIT蛋白随Bmi-1、AEG-1表达升高出现下降的趋势，但差异并不明显。根据实验检测计算结果三种基因表达情况与Real-Time PCR得出结果相一致;
　　(3)免疫组化结果:
　　a膀胱正常粘膜组织:Bmi-1蛋白表达率为10％;AEG-1蛋白表达率为20％; FHIT蛋白表达率为90％。膀胱癌组织:Bmi-1蛋白表达率为60.87％; AEG-1蛋白表达率为73.91％; FHIT蛋白表达率为43.48％。
　　bTNM临床分期，Tis-T1期:Bmi-1蛋白阳性表达率为55.56％; AEG-1蛋白阳性表达率为66.67％; FHIT表达率为48.15％。T2-T4期:Bmi-1阳性表达率为68.42％; AEG-1阳性表达率为84.21％;FHIT蛋白表达率为36.84％。
　　c病理分级，低级别:Bmi-1蛋白阳性表达率为37.50％; AEG-1蛋白阳性表达率为58.33％; FHIT表达率为58.33％。高级别:Bmi-1蛋白阳性表达率为86.36％; AEG-1阳性表达率为90.91％; FHIT蛋白表达率为27.28％。
　　d淋巴结转移，无淋巴节转移组:Bmi-1蛋白的表达率为43.33％;AEG-1蛋白的表达率为60％; FHIT蛋白表达率为56.67％。有淋巴结转移组:Bmi-1蛋白表达率为93.75％; AEG-1蛋白表达率为100％; FHIT表达率为18.75％。
　　上述检测的结果可以看出，随着膀胱癌细胞的恶性程度逐渐加重，膀胱癌高表达基因Bmi-1、AEG-1蛋白的表达也随之升高。二者在临床T分期中低分期与高分期无明显差异，无统计学意义(P＞0.05);但在临床病理分级及有无淋巴结转移组中随恶性程度加重，各自表达明显差异，有统计学意义（P＜0.05）。而FHIT蛋白随着膀胱癌细胞的浸润程度和转移的程度逐渐加重，其表达逐渐降低;在临床T分期之间无明显差异，无统计学意义(P＞0.05);在临床病理分级及有无淋巴结转移组中表达差异有统计学意义(P＜0.05）。与荧光定量PCR、Weston-blot结果相一致;
　　(4) Bmi-1和AEG-1呈正相关，rs'值为0.741。Bmi-1和FHIT、AEG-1和FHIT均呈负相关，rs'分别为-0.645，-0.667，均具有统计学意义(P＜0.05)。
　　结论:
　　1 Bmi-1、AEG-1和FHIT的阳性表达与临床病理分级及淋巴结转移密切相关，与TMN临床分期无明显相关。根据实验数据，随膀胱癌浸润、转移的程度趋势，Bmi-1和AEG-1的阳性表达率也随之变化，且两者呈正相关，在膀胱癌的发生发展及浸润转移中可能存在相互协同关系;FHIT的阳性表达情况随Bmi-1和AEG-1的阳性表达增高而随之降低，呈负相关，在膀胱癌的发生发展及浸润转移中可能存在相互制约又协同关系。
　　2本实验认为在膀胱移行细胞癌的进展中可能Bmi-1、AEG-1和FHIT在相互发挥作用。
　　3证实了AEG-1、FHIT基因与膀胱移行细胞癌关系密切，可能参与了膀胱移行细胞癌发生发展过程，Bmi-1可能通过某种机制协同AEG-1表达以及下调FHIT基因。
　　4 FHIT基因在正常膀胱组织与膀胱移行细胞癌中有显著差异，在肿瘤不同病理分级及有无淋巴结转移中随恶性程度增加及淋巴结转移，表达量降低，有显著统计学意义。FHIT基因低表达或缺失可能成为膀胱癌诊断的一项辅助指标。

目录

声明

摘要

英文缩写

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 Bmi-1、FHIT与膀胱癌及其相关肿瘤作用机制研究进展

致谢

个人简历