非小细胞肺癌患者新鲜细胞学标本基因检测及临床意义

摘要

目的：随着肿瘤分子生物学的发展，靶向治疗以其选择性高、副作用小、疗效好的特点，在肿瘤治疗中占据了越来越重要的地位，尤以非小细胞肺癌靶向治疗的效果最为显著，但并不是对所有病人都有效，对一小部分有EGFR敏感突变和ALK融合基因阳性的病人疗效较好，因此NSCLC患者在接受靶向治疗前，需进行基因突变检测。目前，用于基因检测的标本大多采用肿瘤组织的石蜡标本，但晚期患者很难获得。因此，本研究拟采用新鲜的胸腹水和针吸等细胞学标本进行基因突变的检测。预计完成以下目的：
　　1、探讨采用NSCLC患者的细胞学标本检测EGFR基因和ALK基因的优势以及EGFR基因突变情况与临床特症之间的关系；
　　2、探讨采用细胞学标本检测的EGFR基因敏感突变的NSCLC患者一线运用TKI药物后的疗效和生存期分析，并与以往文献报道的采用肿瘤组织石蜡标本检测的EGFR基因敏感突变患者应用TKI后的疗效和生存期相比较。
　　方法：
　　1、收集河北医科大学第四医院癌检中心的针吸和胸腔积液标本376例，经 HE染色、免疫细胞化学染色后由两位细胞病理医师先确诊，并记录患者的性别、年龄、吸烟情况、病理类型、标本类型等。
　　2、对其中293例针吸和胸水标本采用ARMS法进行EGFR基因18-21外显子突变的检测，观察突变情况并分析其与临床特征的关系。
　　3、23例肺腺癌胸水标本经细胞采集器富集细胞，直接涂片后采用FISH法观察EML4-ALK基因融合情况。
　　4收集采用细胞学标本检测的 EGFR敏感突变的 NSCLC患者138例，根据一线用药情况分为A组（靶向治疗组44例）、B组（靶向治疗加化疗组45例）和 C组（化疗组49例），并比较各组客观有效率（ ORR）、疾病控制率（ DCR）、无进展生存期（ PFS）、总生存期（OS）和年生存率。
　　结果：
　　1、HE染色找到癌细胞361例，免疫细胞化学染色确诊为NSCLC患者316例。这316例患者中针吸标本102例，胸腔积液标本214例；腺癌307例，鳞癌9例。
　　2、EGFR基因突变检测结果：293例进行检测患者中，288例提取DNA成功，提取成功率约为98.3％， EGFR基因总的突变率为45.1%（130/288）。其中18号、19号、20号、21号外显子突变例数占总突变例数的百分比分别为3.8%（5/130）、46.2%（60/130）、3.8%（5/130）、46.2%（60/130）。男性患者突变率为37.2%（55/148），女性患者突变率为53.6%（75/140），两者之间有统计学差异（P=0.005）。年龄≥60岁的患者突变率为45.8%（71/155），年龄﹤60岁的患者突变率为44.4%（59/133），两者之间无统计学差异（ P=0.806）。吸烟患者突变率为35.5%（33/93），不吸烟患者突变率为49.7%（97/195），两者之间有统计学差异（P=0.023）。腺癌患者突变率为46.2%（129/279），鳞癌患者突变率为11.1%（1/9），两者之间有统计学差异（P=0.044）。细针穿刺标本的突变率为37.4%（37/99），胸腔积液标本的患者突变率为49.2%（93/189），两者之间无统计学差异（P=0.055）。
　　3、EML4-ALK基因检测结果:23例胸水标本，其中阳性3例，阳性率为13.0%。3例阳性患者的平均年龄为50岁,且全部为腺癌，男性1例，有吸烟史;女性2例，均无吸烟史。
　　4、应用TKI药物的疗效和生存期情况：A组、B组和C组的ORR分别为81.8%、80%和30.6%， DCR分别为93.2%、86%和71.4%，中位PFS分别为9.5个月、7.5个月和6个月，中位OS分别为19.5个月、13.25个月和9个月，年生存率分别为52.3%、33.3%、28.5%。靶向治疗组与靶向治疗加化疗组的疗效和生存期都优于化疗组，与以往文献报道采用肿瘤组织石蜡标本检测的EGFR基因敏感突变患者应用TKI后的疗效和生存期相符。
　　结论：
　　1、运用新鲜细胞学标本采用ARMS法检测的 NSCLC患者的EGFR基因突变与以往文献报道的运用石蜡标本检测的突变率基本一致，且克服了传统测序法灵敏度偏低以及福尔马林和石蜡对 DNA提取和 PCR扩增的不利影响，具有较高的的实用性和准确率。
　　2、NSCLC患者的 EGFR基因突变主要集中在女性、不吸烟、腺癌的人群中，与年龄无关。
　　3、在NSCLC患者的EGFR突变中，胸腔积液标本比针吸标本突变率稍高，但差异无统计学意义。
　　4、EML4-ALK基因已成为 NSCLC患者治疗的新靶点，采用脱落细胞直接涂片后 FISH检测的方法，取样简单、可重复性强、敏感性高，能够在临床上广泛推广。
　　5、采用新鲜细胞学标本检测的EGFR基因敏感突变的NSCLC患者一线应用TKI药物后疗效确切，能够提高患者的生存质量，延长生存期。

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中文摘要

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前言

材料与方法

1临床资料的收集

2主要仪器及试剂

3标本采集及处理

4 HE染色

5免疫细胞化学

6 EGFR基因检测

7 ALK基因检测

8靶向治疗

9统计学分析结果:

结果

1 HE染色

2免疫细胞化学

3 EGFR基因突变情况

4 ALK基因突变情况

5靶向药物治疗情况

附图

附表

讨论

1标本类型

2 HE染色及免疫细胞化学

3 EGFR基因突变情况及检测方法

4 ALK基因融合情况及检测方法

5靶向药物治疗情况

结论

参考文献

综述:新鲜细胞学标本的EGFR基因检测

致谢

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