补中益气汤对糖尿病胃轻瘫大鼠血浆P物质及胃窦SCF蛋白表达的影响

摘要

目的：应用链脲佐菌素（STZ）左下腹注射制备糖尿病胃轻瘫(diabetic gastroparesis，DGP)大鼠模型，给予中药补中益气汤及枸橼酸莫沙必利对该模型进行干预治疗，利用Westernblot法对胃窦SCF蛋白表达进行测定，放射免疫法检测血浆SP水平，通过观察大鼠的一般情况、胃排空率等，研究探讨补中益气汤对糖尿病胃轻瘫大鼠胃排空率、胃窦SCF蛋白表达、血浆SP水平的影响，探讨补中益气汤对DGP大鼠胃肠的作用及其可能机制，并为中医药临床治疗DGP提供实验依据。
　　方法：雄性wistar大鼠40只，清洁级，重量（200±20）g/只，购自河北医科大学动物中心。将实验大鼠购回先适应性饲养1W，观察大鼠的一般情况，均正常者用于实验。取30只禁食12h，将链脲佐菌素左下腹注射 STZ55.0mg/kg（用0.1M，PH＝4.2的柠檬酸钠-柠檬酸缓冲溶液配制成10mg/mL的溶液），观察造模组出现多饮、多食、多尿后，检测空腹血糖在16.7mmol/mL以上者为糖尿病模型制备成功，用高能量食料单日上午喂食，双日下午喂食，打乱大鼠进食规律，喂养4周,随机抽取2只大鼠和正常大鼠1只，处死，测胃内残留率较正常大鼠升高，造成胃轻瘫模型，在造模过程中大鼠死亡1只。将造模成功后大鼠随机分成补中益气汤组、西药组、模型对照组3组，各9只，另外9只未造模大鼠为非糖尿病正常空白组，总共为4组。每天记录3组大鼠的饮水量、食量、尿量、活动情况及大便变化，并每周于大鼠尾静脉测血糖和称体重一次。各组均在造模后1W同时开始灌胃给药，其给药剂量为：正常组及模型对照组，生理盐水15mL/kg；补中益气汤组15mL/kg，西药组枸橼酸莫沙必利5mg/kg，分别给大鼠灌胃，每天1次，灌胃共7W。治疗满7W后，各组给予半固体糊(羧甲基纤维素2.6g，淀粉2g,奶粉4 g,蒸馏水62.5 mL配成)，比重为1.1g·mL-1。按照3mL·kg-1体重ig。于30min后将大鼠断头处死，然后于断头处采5mL血，检测SP水平，迅速打开大鼠腹腔，并结扎贲门及幽门，取下整胃，用滤纸轻轻拭干之后，称量其胃全重。然后沿着大弯切开胃，并以蒸馏水反复冲洗胃的内容物，用滤纸拭干后称量胃净重。按公式计算胃排空率:胃排空率=［1-(胃全重-胃净重)/所给的糊重］×100％。取胃窦部组织(约100mg),提取蛋白质，用Western Blot方法测定SCF的蛋白质表达水平。
　　结果：⑴实验大鼠一般状况：正常组的大鼠精神状态良好，活动自如，进食量、饮水量及尿量均无明显改变，大鼠体重逐渐增加；模型组大鼠造模后一直持续出现多饮、多食及多尿，体重逐渐减轻，皮毛毛躁干枯泛黄；中药组和西药组大鼠均较模型组的一般情况有一定的改善。在实验中，由于造模过程不当，模型组大鼠有一只死亡；⑵大鼠体重变化：与正常组大鼠相比较，模型组、中药组及西药组大鼠的体重均有明显减轻，其差异均有统计学意义(P＜0.05)；中药组和西药组大鼠的体重与模型组相比有所增加，其差异均有统计学意义(P＜0.05)；中药组体重较西药组有所增加，其差异有统计学意义(P＜0.05)；⑶大鼠血糖变化：模型组、中药组及西药组的大鼠血糖均较正常组明显升高，差异具有统计学意义(P＜0.05)；中药组大鼠的血糖水平与模型组大鼠相比，血糖降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)；西药组和模型组大鼠血糖相比较，血糖降低，其差异无统计学意义(P＞0.05）；中药组和西药组血糖相比，差异具有统计学意义(P＜0.05）；⑷大鼠的胃窦平滑肌组织应用苏木素-伊红（HE)染色显示：正常组大鼠胃窦粘膜组织结构完整，血管丰富，腺体排列整齐；中药组、西药组胃窦粘膜尚完整，血管较丰富，腺体排列比较整齐；模型组大鼠胃窦粘膜不完整，血管数量明显减少，腺体排列紊乱；⑸大鼠胃排空率与正常组相比，模型组、中药组、西药组大鼠的胃排空率下降，差异具有统计学意义(P＜0.05)；中药组、西药组大鼠胃排空率较模型组相比均明显增加，差异有统计学意义(P＜0.05)；中药组和西药组胃排空率比较，胃排空率高，差异有统计学意义(P＜0.05)；⑹大鼠血浆SP水平变化：模型组、中药组、西药组大鼠的血浆SP水平低于正常组，差异具有统计学意义(P＜0.05)；中药组和模型组比较大鼠血浆 SP减少，差异有统计学意义(P＜0.05)；西药组和模型组比较大鼠血浆 SP减少，差异有统计学意义(P＜0.05)；中药组和西药组比较升高血浆 SP水平效果无统计学意义(P＞0.05）；⑺大鼠胃窦 SCF蛋白表达：模型组、中药组、西药组大鼠胃窦SCF蛋白表达低于正常组，差异有统计学意义(P＜0.05)；中药组和模型组比较大鼠SCF蛋白表达减少差异有统计学意义(P＜0.05)；西药组和模型组比较大鼠SCF蛋白表达减少差异有统计学意义(P＜0.05)；中药组和西药组比较升高SCF蛋白表达效果有统计学意义(P＜0.05）。
　　结论：①糖尿病胃轻瘫大鼠存在胃肠运动障碍，补中益气汤能够降低DGP大鼠血糖水平，提高大鼠胃排空率，可能为其治疗DGP的作用机制之一。②补中益气汤促进大鼠的胃排空治疗DGP大鼠，可能通过提高大鼠血浆SP水平，增加胃肠道蠕动，进而促进胃排空。③补中益气汤可以通过提高大鼠胃窦SCF蛋白表达，增强SCF/KIT信号传导，加快胃肠蠕动，促进胃排空治疗DGP，为中医药治疗 DGP提供了实验依据。

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前言

材料和方法

1 材料

2 实验方法

3 统计学分析

结果

1 实验大鼠的一般状况

2 大鼠体重变化

3 大鼠血糖变化

4 大鼠胃窦平滑肌组织苏木素-伊红（HE)染色

5 大鼠胃排空率变化

6 大鼠血浆SP水平变化

7 大鼠胃窦SCF蛋白表达

附图

附表

讨论

1 造模方法

2 中医对糖尿病胃轻瘫的认识

3 从中气不足认识糖尿病胃轻瘫

4 P物质与SCF蛋白表达的关系及其相关疾病

结论

参考文献

综述: 补中益气汤治疗胃肠疾病

致谢

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