缩写表
摘要
Abstract
文献综述 热激胁迫及其信号转导
1.热激反应概述
2.热激蛋白的种类
3.热激蛋白的生理功能
3.1保护性作用
3.2热激蛋白的分子伴侣功能及在信号转导中的作用
3.3热激蛋白在发育过程中的作用
4.热激基因的表达
4.1热激基因启动子
4.2热激转录因子
4.3热激基因的表达
5.热激反应信号转导
5.1 Ca2+和CaM
5.2蛋白激酶和蛋白磷酸酶
5.3其它
6.展望
前言
材料与方法
1.材料及实验设备
2.实验方法
2.1植物材料的培养
2.2热激元件(HSE)及突变的热激元件(HSEm)的合成及标记
2.3全蛋白提取液的制备
2.4热激处理
2.5凝胶阻滞分析
2.6质粒的提取(碱裂解法)
2.7 DNA琼脂糖电泳
2.8大肠杆菌感受态细胞的制备及转化
2.9低融点琼脂糖法回收DNA
2.10总RNA的提取
2.11 RNA电泳
2.12 RNA浓度及纯度的鉴定
2.13 PCR法扩增hsp70基因
2.14 RT-PCR法扩增玉米zmhsfa基因DNA结合域的cDNA片段
2.15工程菌在大肠杆菌中的诱导表达
2.16细胞质的分离
2.17天然HSP70的分离纯化
2.18抗原HSP70的分离纯化
2.19 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)
2.20免疫印迹法(westernblot)
2.21酶联免疫吸附測定(ELISA)
2.22抗血清的制备
2.23免疫共沉淀
2.24蛋白质含量的测定
结果与分析
1.Ca2+和CaM影响HSF的DNA结合活性
1.1热激诱导的HSF的活化
1.2热激诱导的HSF活化的时间动力学
1.3 HSF与HSE结合的专一性试验
1.4 Ca2+对HSF的DNA结合活性的影响
1.5 CaM对HSF的DNA结合活性的影响
2.HSP70和HSF的纯化及抗血清的制备
2.1 HSP70的分离纯化及抗血清的制备
2.2 HSFa片段的分离纯化及抗血清的制备
3.HSF、HSP70和CaM间的相互作用
3.1 HSP70与HSF间的相互作用
3.2 CaM与HSP70间的相互作用
讨论
1.Ca2+及CaM影响热激基因的转录及HSPs的合成
2.Ca2+和CaM影响HSF的DNA结合活性
3.CaM调节HSF活性机制的初步探讨
结论
参考文献
个人简历
附录
致谢
