预防仔猪腹泻基因工程菌株的构建

摘要

由产肠毒素型大肠杆菌引起的仔猪黄白痢和由魏氏梭菌引起的仔猪红痢是影响猪体健康的常见疾病，可严重影响仔猪的存活率和出栏率，给养猪业造成了巨大的经济损失。 本文采用微生物分离方法从栾城县某养猪场患病仔猪的粪便中分离到致病性大肠杆菌，经形态学、生化和分子生物学鉴定为产肠毒素型大肠杆菌。以此菌株为研究对象，根据GeneBank公布的猪源致病性大肠杆菌LTB基因全序列设计了一对引物，以分离菌株的基因组为模板扩增出LTB基因，序列分析表明与其它参考菌株M17873(猪源ETEC的LTB)序列同源性为100％。然后，利用定点突变技术将形成ST1分子内二硫键的半胱氨酸碱基进行了突变，最后将突变的ST1基因与LTB基因融合，定向克隆于原核表达载体pET-28b中，得到了重组质粒pBETST3LTB，转化受体菌BL21(DE3)，得到重组菌株BL21(DE3)(pBETST3LTB)，该菌株经IPTG诱导后，SDS-PAGE分析可见其表达的30KD特异蛋白条带，经ST和LTELISA检测试剂盒检测，重组菌株表达的ST1-LTB融合蛋白能够被ST和LT单抗识别。从本实验室保存的预防仔猪红痢的基因工程候选菌株的质粒中扩增出魏氏梭菌α-β毒素保护性抗原基因，通过分子生物学手段构建到ST1-LTB基因下游，得到了重组菌株BL21(DE3)(pBETST3LTBαβ)，该菌株经IPTG诱导后，SDS-PAGE分析可见其表达的110KD特异蛋白条带。将构建的基因工程菌株BL21(DE3)(pBETST3LTB)和BL21(DE3)(pBETST3LTBαβ)灭活后分别辅以中草药佐剂进行了初步免疫原性研究，结果显示本实验构建的2株基因工程菌株均具有较好的免疫保护作用，为进一步研制预防仔猪腹泻的基因工程疫苗奠定了坚实的基础。

目录

前言

摘要

缩写词表

第一部分文献综述

第二部分研究报告 第一章仔猪黄白痢病原菌的分离

第二部分研究报告 第二章仔猪黄白痢二价基因工程菌株的构建

第二部分研究报告 第三章仔猪腹泻多价基因工程菌株的构建

第二部分研究报告 第四章仔猪腹泻基因工程菌株的保护性实验

讨论

结论

参考文献

致谢