桃(Prunus persica(L.)Batsch)果实酸性状的分子标记研究

摘要

桃树是世界上广泛栽植的果树之一.非酸/酸是决定桃果实品质的重要性状,寻找与非酸/酸性状紧密连锁的分子标记对桃树育种具有重要意义.以桃品种京玉(Dd)、美味(dd)及其杂交所得的BC<,1>代69株实生群体为试材,通过AFLP、SCAR、RAPD分子标记技术对果实性状非酸/酸(D/d)进行了分子标记研究.试验建立了适合桃AFLP分析的技术体系.以CTAB方法提取基因组DNA,去除RNA后作为AFLP分析的模板.将基因组DNA酶切、连接后,将连接产物稀释10倍,用引物组合E+O/M+C进行预扩增.将预扩增产物稀释20倍用作选择性扩增的模板,选用EcoRI+2/MseI+3、EcoRI+3/MseI+3所组成的128对引物组合进行扩增,扩增条带清晰、多态性高,适合桃基因组分析.将差异片段进行回收、克隆及测序分析,结果表明三种引物组合E-TA/M-CTC、E-AT/M-CTA、E-ACT/M-CAT扩增的差异片段分别为140bp、199bp、408bp.根据测序结果设计引物,将199bp片段转化为共显性的SCAR标记.通过RAPD技术寻找与果实酸性状连锁的分子标记,建立适合桃RAPD分析的体系.由于RAPD标记检出率低,尽管该试验采用两株极端类型筛选大量引物,但未找到与目的基因紧密连锁的分子标记.

目录

文摘

声明及授权书

文献综述

1分子标记

1.1 RFLP的原理和特点

1.2 RAPD的原理及特点

1.3 AFLP的基本原理及特点

1.4 SCAR的原理及特点

2分子标记在果树种质资源研究上的应用

2.1种质资源的保存

2.2品种鉴定

2.3亲缘关系的演化及分类

2.4系谱分析

2.5遗传多样性分析

3分子标记在果树遗传育种中的应用

3.1分子遗传图谱的构建和基因的定位

3.2基因标记

3.3分子标记辅助选择育种

4存在问题及对策

引言

1材料

1.1试验材料

1.2药品与试剂

2方法

2.1桃DNA的提取

2.2模板DNA的制备

2.3 AFLP分析

2.3.1 AFLP分析方法

2.3.2聚丙烯酰胺凝胶电泳

2.3.3银染程序

2.4凝胶上DNA多态性片段的回收

2.4.1聚丙烯酰胺凝胶上回收DNA片段

2.4.2琼脂糖凝胶上回收DNA片段

2.5目的片段的克隆、测序

2.5.1试剂的制备

2.5.2大肠杆菌DH5 α制备

2.5.3差异片段DNA与T载体的连接

2.5.4质粒的转化

2.5.5质粒提取(碱法)

2.5.6质粒检测

2.6 AFLP标记转化

2.7 RAPD分析

结果与分析

1模板DNA的制备

2 AFLP体系的优化

2.1酶切效果

2.2预扩增

2.3选择性扩增

2.4引物筛选

2.5群体验证差异片段的分离情况

3 AFLP标记转化为SCAR标记

3.1特异片段的回收、及检测

3.2特异片段的克隆、测序

3.3 AFLP标记转化为SCAR标记

4 RAPD体系的优化

4.1 Mg2+最适浓度的优化

4.2模板DNA最适浓度的选择

4.3引物浓度的选择

4.4dNTPs最佳浓度的选择

4.5 Tag DNA聚合酶最佳浓度选择

4.6引物的筛选

4.7差异带的BC1代及亲本验证

讨论

1关于桃酸性状的遗传特征

2 AFLP技术分析

2.1 AFLP分子标记的高效性

2.2影响AFLP试验成败的关键

2.3隐性性状连锁标记的获得

3 AFLP特异片段转化为SCAR标记

4 RAPD技术影响因素

结论

参考文献

附录

Abstract

致谢