胶原蛋白多肽-铬螯合物降血糖、抗热应激保健功效的研究

摘要

胶原蛋白是猪皮中含量较高,活性较为重要的一种蛋白质.该试验以猪皮为原料,选择最佳工艺水解猪皮中的胶原蛋白为小肽,与无机铬CrCl3.6H2O螯合为易于吸收的有机铬形式,并选择昆明种小白鼠作动物试验,研究其降血糖、降血脂及抗应激的保健功能.以猪皮为原料,采用盐酸水解法提取胶原蛋白,确定最佳提取条件.结果表明,用2M的盐酸,85℃,保持PH值为2,3小时条件下,水解产物符合要求,且已经分解为小肽.然后与CrCl<,3>.6H<,2>O以适当比例螯合.实验动物采用昆明种小鼠,糖尿病模型用化学试剂四氧嘧啶按照200mg/kg剂量腹腔注射,正常鼠以同样剂量注射生理盐水,空腹血糖超过11.1mmol/L的小鼠为糖尿病模型.实验小鼠分为4组:正常组,正常喂铬组,模型组,模型喂铬组.造模组以饮水方式按照1ug/d只的剂量喂以Cr<'3+>,每周处死一批,试剂盒测定血液指标.饲养6周后,正常鼠喂铬不会使血糖浓度和血脂指标发生显著变化(P>0.05);模型喂铬组的血糖浓度和甘油三酯含量与模型组相比,下降显著(P<0.05);各组小鼠随机取肝脏匀浆,用生理盐水提取可溶性蛋白乙醇沉淀后以样品缓冲液溶解,采用聚丙烯凝胶电泳分离,各组的蛋白带没有区别.取70只正常小鼠分为两组,其中一组喂铬,方法同上,另一组作为对照,每隔一天处死一批,血液测定法同上.饲养12天后,喂铬组最终的血液指标与正常组比较没有差异,刚喂铬后几天差异明显.同样作肝脏蛋白电泳,差别明显.热应激实验:另取24只小鼠,雌雄各半,分为四组,雌雄各有一组喂以铬,剂量同上,四周后将这些小鼠置于43℃,相对湿度30％的烘箱中,记录各小鼠的死亡时间,l小时死亡率.耐热时间雌鼠比雄鼠略长,但没有统计学意义,喂铬后雌鼠耐热时间显著增长(P<0.05),雄鼠相差不显著(P>0.05).取肝、肾、心、腿提取蛋白电泳,各组蛋白没有差异.

目录

文摘

英文文摘

独创性声明及关于论文使用授权的说明

1引言

1.1糖尿病的发生与发展

1.1.1糖尿病概述

1.1.2糖尿病的分类

1.1.3糖尿病的发病机理及诱因

1.2铬与高血糖及高血脂的关系

1.2.1铬与糖尿病

1.2.2葡萄糖耐量因子学说

1.2.3铬与胰岛素功能的关系

1.2.4铬对糖代谢的影响

1.2.5铬对脂类代谢的影响

1.3铬与应激

1.4猪皮蛋白的组成及性质

1.4.1猪皮结构及胶原蛋白的性质

1.4.2猪皮胶原蛋白的保健功能及提取方法

1.5研究的目的意义

2材料与方法

2.1实验材料

2.1.1药品

2.1.2仪器

2.1.3材料

2.1.4实验动物

2.2实验方法

2.2.1猪皮胶原蛋白多肽的提取

2.2.2猪皮胶原蛋白水解程度的分析

2.2.3胶原蛋白的定量测定-羟脯氨酸的比色测定法

2.2.4猪皮胶原蛋白消化液与铬(Ⅲ)螯合物的制备

2.2.5成品中铬(Ⅲ)与铬(Ⅵ)含量的测定

2.2.6成品螯合性的检测

2.2.7动物试验

3结果与分析

3.1猪皮胶原蛋白多肽-铬(Ⅲ)结果分析

3.1.1猪皮提取胶原蛋白多肽最佳工艺确定

3.1.2猪皮消化液水解程度的分析

3.1.3猪皮中胶原蛋白含量的测定

3.1.4螯合后成品性状及铬(Ⅲ)和铬(Ⅵ)含量的测定

3.1.5胶原蛋白多肽-铬(Ⅲ)螯合性检测

3.2动物实验各项结果分析

3.2.1糖尿病模型组小鼠数据分析

3.2.2小组降糖预实验结果分析

3.2.3螯合物对模型+高糖高脂动物血糖的影响结果分析

3.2.4短期高糖高脂动物实验指标及结果

3.3胶原蛋白多肽-铬螯合物对热应激小鼠部分生化指标的影响

3.3.1小鼠热应激表观现象观察

3.3.2小鼠热耐受时间表

3.3.3热应激试验前后小鼠血糖分析

3.3.4小鼠不同器官可溶性蛋白提取分析

4讨论

4.1有关提取工艺

4.1.1猪皮胶原蛋白多肽的提取

4.1.2铬(Ⅲ)的安全性问题

4.1.3胶原蛋白多肽与三价铬的螯合

4.2动物试验

4.2.1试验动物模型的制作

4.2.2胶原蛋白多肽-铬对试验小鼠血糖和肝糖原水平的影响

4.3螯合物对模型+高糖高脂动物影响结果分析

4.3.1螯合物对试验动物血糖的影响

4.3.2螯合物对试验动物血脂的影响

4.3.3胶原蛋白多肽-铬(Ⅲ)螯合物对试验小鼠肝糖原的影响

4.4短期高糖高脂动物试验血液指标及结果分析

4.5胶原蛋白多肽-铬螯合物对热应激小鼠部分生化指标的影响分析

5结论

参考文献

在读期间发表的学术论文

作者简历

致谢