荷斯坦奶牛活体采卵与体外受精技术研究

摘要

本研究对影响荷斯坦奶牛活体采卵(ovumpick-up，OPU)效果的主要因素进行了探讨，并对提高荷斯坦奶牛早期胚胎体外发育率的方法进行了研究，旨在建立一套比较完善的荷斯坦奶牛活体采卵-体外受精(invitrofertilization，IVF)技术操作体系。研究的主要内容为：影响荷斯坦奶牛活体采卵效果的主要因素研究、提高荷斯坦奶牛早期胚胎体外发育率研究和荷斯坦奶牛胚胎体外化生产操作体系研究。 在奶牛活体采卵技术研究中，研究了不同采卵负压(70，90，110，130mmHg)、不同采卵时间间隔(第一次、间隔3d、间隔7d、间隔14d)以及采卵前FSH预处理对活体采卵效果的影响，结果表明：OPU负压影响卵母细胞的回收率和质量。70mmHg负压下的头均获卵数(4.35±2.03枚)显著低于其它各组(P＜0.05)，其它各组间差异不显著；70mmHg负压下的回收率(44.16﹪)显著低于90mmHg负压下的回收率(56.04﹪)(P＜0.05)；110mmHg、130mmHg负压下的回收率之间差异不显著(66.03﹪vs67.29﹪)，但均显著高于70mmHg和90mmHg组(P＜0.05)；130mmHg负压下的A、B级卵母细胞率为48.61﹪，显著低于其它各组(P＜0.05)，其它各组间差异不显著。在本实验条件下，综合考虑卵母细胞回收率和质量，采用负压110mmHg可以获得较好的OPU结果(回收率为66.03﹪，A、B级卵母细胞率为68.84﹪)。OPU时间间隔影响可穿刺卵泡数量、获卵数和回收率。采用3d的时间间隔进行OPU，头均穿刺数(7.71±1.51)、头均获卵数(5.29±1.19)显著低于其它各组(P＜0.05)；但是回收率(68.61±4.19﹪)显著高于其它各组(P＜0.05)；在同样1w的时间内，间隔3d进行OPU比间隔7d、14d可获得较多的卵母细胞(平均10.58枚/w)。OPU前对供体牛用FSH进行处理，头均穿刺数为12.36±2.39，头均获卵数为8.60±1.85，均显著高于对照组(P＜0.05)；A、B级卵母细胞率(75.19﹪)、卵裂率(58.77﹪)和桑囊发育率(27.61﹪)与对照组差异均不显著。 在提高荷斯坦奶牛早期胚胎体外发育率的研究中，对比了不同培养液对早期胚胎体外发育的影响。结果表明，将原培养体系的发育液IVMD-101替换为TCM-199+BSA+Pyruvate+ITS(胰岛素-转铁蛋白-硒，Insulin-Transferrin-Selenium)+ab，可显著提高体外胚胎的桑椹胚率(25.16﹪)和囊胚率(17.42﹪)，与IVMD-101组(分别为12.26﹪，8.49﹪)相比差异显著(P＜0.05)；ITS的最佳添加浓度为10μl/ml。 在荷斯坦奶牛胚胎体外生产体系研究中，将活体采卵获得的卵母细胞经体外成熟后用常规精液和性控精液分别受精，然后进行体外培养，结果表明：X、Y精子分离的性控精液可以成功的应用于奶牛体外受精，生产预知性别的奶牛胚胎，桑椹胚率为27﹪，囊胚率为18﹪，与用常规精液进行体外受精的效果相比没有显著差别。 总之，将OPU技术与IVF技术相结合进行荷斯坦奶牛胚胎的体外化生产是完全可行的，本研究共OPU12次，每次OPU头均获可用卵7.5枚，经体外受精后获囊胚1.2枚。

目录

文摘

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1引言

2材料与方法

3实验结果

4讨论

5结论

参考文献

附录附图及说明

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