平菇原生质体再生及无性变异株的初筛

摘要

平菇(Pleurotus ostreatus)是一类重要的食用菌，其适应性强，栽培原料来源广，产量高，效益好，近年来发展迅猛，已成为城乡人民大众化的菌类蔬菜。但是，目前平菇产业发展面临着品种由于长期无性繁殖而退化明显、产量不稳、育种手段单一等实际问题，为了提高育种的效果和加速品种更新换代，本实验采用原生质体再生技术进行平菇新菌株的选育，对平菇原生质体制备及再生条件进行优化，将得到的再生菌株进行初步筛选的一系列试验，旨从细胞水平上探索一条食用菌育种新途径，为发展和完善食用菌新菌株选育提供依据。 1.本试验对影响平菇原生质体制备及再生条件的几大因素综合酶种类、酶浓度、菌龄、酶解温度、酶解时间、稳渗剂及培养基等条件进行了研究，结果表明，以PDA液体综合培养基培养5d的幼嫩菌丝体，单一酶以2％浓度的溶壁酶或混合酶以1％的纤维素酶和1％的蜗牛酶，在30℃下作用3h，以0.6mol/IL的MgSO4为渗透压稳定剂是制备平菇原生质体的最佳条件；以菌龄为3d，酶解时间为1h，0.6mol/L的MgS04为渗透压稳定剂的PDA再生综合培养基为原生质体再生的最佳条件，再生率最高达到4.35％。 2.采用优化的条件进行原生质体的制备与再生，最终再生出98个再生菌株，对再生植株菌丝体进行镜检，获得47个具有锁状联合的菌株。将再生菌株分别与出发菌株进行拮抗试验，获得39个再生菌株菌丝与其亲本有明显的拮抗线。 3.通过对39个再生菌株与出发菌株的菌丝颜色、密度、生长势等方面的比较试验，得到各方面优于出发菌株的再生植株。在平板中进行菌丝长速测定发现，各菌株间长速有差异性，7、11、13、17、26、36、37高于出发菌株，生长速度与生长势有相关性。对栽培种进行长速测定发现，各菌株差异显著，而且和平板中菌丝长速相关，平板中长速快的，栽培种的长速也快。 4.抗绿霉试验获得在抗杂能力优于出发菌株的再生菌株，通过抗绿霉试验，发现1、3、7、14、18、24、25、26、30、33、37、38这几个再生菌株与绿霉的拮抗线宽于出发菌株，说明其抗杂能力比出发菌株高，长势好的菌株抗杂能力也强。可作为进一步筛选的依据。

目录

文摘

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论文说明：缩略词

声明

1引言

1.1食用菌研究的重要意义

1.2食用菌传统育种方法的研究进展

1.2.1人工选择育种

1.2.2诱变育种

1.2.3杂交育种

1.3原生质体技术育种

1.3.1原生质体的制备及再生

1.3.2原生质体再生无性系

1.3.3原生质体诱变技术

1.3.4原生质体融合技术

1.3.5原生质体单核化技术

1.3.6原生质体转化技术

1.4基因工程育种

1.5平菇的形态特征及研究进展

1.6平菇的食药用价值及选育的重要性

1.7本研究的内容、目的和创新之处

2材料与方法

2.1试验材料

2.1.1供试菌株

2.1.2供试培养基

2.1.3试验试剂

2.2试验方法

2.2.1菌丝体的培养

2.2.2酶液配制

2.2.3原生质体的制备

2.2.4原生质体的再生

2.2.5平菇原生质体制备及再生条件的优化

2.2.6原生质体再生菌株双核菌丝镜检及拮抗反应

2.2.7不同菌株菌丝生长情况的比较

2.2.8抗绿霉情况比较

3结果与分析

3.1原生质体的制备

3.1.1酶系统的选择

3.1.2酶浓度的选择

3.1.3菌龄的选择

3.1.4酶解温度的选择

3.1.5酶解时间的选择

3.1.6 pH的选择

3.1.7渗透压稳渗剂的选择

3.2原生质体再生条件的优化

3.2.1菌龄对原生质体再生的影响

3.2.2酶解时间对原生质体再生的影响

3.2.3渗透压稳定剂对原生质体再生的影响

3.2.4培养基选择

3.3原生质体再生菌株的初筛

3.3.1双核菌丝镜检

3.3.2不同菌株菌丝生长情况的比较

3.3.3抗绿霉情况

4讨论

4.1原生质体制备条件的研究

4.2原生质体的再生

4.3镜检单双核和拮抗反应

4.4再生菌株菌丝体阶段特征

4.5抗绿霉情况

5结论

参考文献

在读期间发表的论文

作者简历

致谢