应用FRET探针分型技术快速检测羊BMPR-IB基因多态性研究

摘要

繁殖性状是羊的重要经济性状之一,繁殖性能高低直接关系到羊养殖业生产成本和生产效率,增加羊每胎的产羔数是提高生产效益的重要措施。BMPR-IB基因是绵羊产羔数的主效基因,点突变基因即FecB基因(A746G)可以用于对绵羊多胎品系的选择。本研究的目的是建立一种能够自动化、简便、快速准确、高通量的绵羊BMPR-IB基因分型方法,为绵羊高繁殖力的标记辅助选择和育种提供新的方法技术。选用报道有BMPR-IB基因多态性的小尾寒羊、不含有BMPR-IB基因多态性的道赛特羊及其杂交F1、F2代羊为材料,建立FRET探针分型技术,应用FRET探针分型技术快速检测羊BMPR-IB基因多态性的方法,对道赛特与小尾寒羊F2代横交固定所产公羊的BMPR-IB基因多态性进行系统检测和统计分析。
　　 本试验首先通过PCR-RFLP分型方法找到三种基因型的样本,设计探针以及不同的引物对进行试验,建立FRET探针分型技术,通过测序对两种分型结果进行验证。本试验利用的FRET探针分型方法是一种改进的FRET探针分型技术。采用荧光基团与淬灭基团的组合代替通常利用的两个荧光基团,通过熔解曲线的差异进行基因分型。试验结果如下:
　　 1.获得BMPR-IB基因的第6内含子序列,前651个碱基与人的同源性为84％,后面序列同源性较差。
　　 2.通过对试验条件的摸索,以及对140份样本的验证,证明利用FRET探针分型技术快速检测绵羊BMPR-IB基因(A746G)多态性的方法准确性达到100%,具有可行性。此方法快速,准确,简便,自动化程度高,分型结果直观、易于在实践中推广和应用于大规模群体的检测。
　　 3.在对F2代横交固定所产的158只公羊检测中只有两种基因型,B+基因型频率为0.03,++基因型频率为0.97;对32只横交固定所产双羔羊检测中也只有两种基因型,B+基因型频率为0.22,++因型频率为0.78。
　　 4.随着杂交代数的增加,B基因频率出现明显降低的趋势。