褪黑素对热应激雄鼠精子质量及其后代胚胎发育的影响

摘要

热应激在实际生产中可对家畜繁殖造成重大影响，目前热应激研究所采用的热应激条件与实际生产环境中热应激条件差距较大，更贴近实际生产中热应激条件的实验结果更有助于解决生产中出现的热应激问题。
　　褪黑素是松果腺分泌的一种吲哚类激素，许多研究都证明其具有高效的抗氧化性，褪黑素是否能够缓解热应激对雄鼠精子及其后代胚胎的影响还不清楚。
　　本研究利用人工气候箱模拟北京夏季高温环境，用两种不同程度热应激对雄鼠进行全身、连续的热应激;在热应激过程中按10mg/kg比例对雄鼠腹腔注射褪黑素溶液。对热应激后以及注射褪黑素后雄鼠精子质量及其后代胚胎发育进行测定和观察，研究热应激对雄鼠精子及其后代胚胎发育的影响以及褪黑素添加是否能够缓解热应激对雄鼠精子及其后代胚胎发育的影响。
　　热应激不仅可以通过影响母体输卵管及子宫环境进而影响胚胎发育，还可直接对受精后胚胎本身产生影响。褪黑素是否可以缓解热应激对体外培养胚胎的影响还不清楚。本实验在胚胎体外培养的培养液中添加不同浓度(10-7M、10-9M)褪黑素。观察褪黑素是否可缓解41℃持续2h的热应激对体外培养胚胎发育的影响。
　　实验结果表明:
　　日最高温度为37.3℃的较严重热应激会显著影响雄鼠的精子质量及其后代的胚胎发育，能够显著提高热应激雄鼠后代胚胎的碎裂率。
　　日最高温度为35.6℃的热应激仅对雄鼠精子密度，质膜完整性及雄鼠后代胚胎的囊胚凋亡细胞数造成显著影响，未对雄鼠精子的其他指标及雄鼠后代胚胎发育情况造成显著影响。褪黑素添加能够显著缓解日最高温度为35.6℃的热应激对雄鼠精子密度，活力，活率及质膜完整性的影响。
　　热应激体外培养的胚胎可显著降低胚胎发育到囊胚的比例，胚胎培养液中褪黑素的添加未能缓解热应激对体外培养胚胎发育的影响。

目录

声明

缩略语表

摘要

1 引言

1．1 热应激

1．1．1 热应激与雄性繁殖

1．1．2 热应激与胚胎发育

1．1．3 热应激与活性氧

1．2 褪黑素的研究进展

1．2．1 褪黑素与生物节律

1．2．2 褪黑素与繁殖

1．2．3 褪黑素的抗氧化作用

1．2．4 褪黑素与褪黑素受体

1．2．5 褪黑素与早期胚胎发育

1．3 本研究的目的意义

2 材料与方法

2．1 实验材料

2．1．1 实验仪器及耗材

2．1．2 实验试剂

2．1．3 主要试剂的配制

2．1．4 实验动物

2．2 试验方法

2．2．1 人工气候箱环境检测

2．2．2 体重和睾丸重测定

2．2．3 精子密度和活力的测定

2．2．4 小鼠精子质膜完整性检测

2．2．5 早期胚胎培养

2．2．6 囊胚凋亡染色(TUNEL检测)

2．3 实验设计

2．3．1 热应激雄鼠实验

2．3．2 热应激胚胎实验

2．4 数据分析

3 结果与分析

3．1 热应激雄鼠实验

3．1．1 未添加褪黑素热应激实验

3．1．2 添加褪黑素热应激实验

3．2 热应激胚胎实验

3．2．1 热应激及褪黑素添加对体外培养小鼠胚胎发育的影响

3．2．2 热应激及褪黑素添加对体外培养小鼠胚胎囊胚质量的影响

4 讨论

4．1 利用人工气候箱模拟高温环境进行热应激实验

4．2 热应激对雄鼠精子及其后代胚胎的影响

4．3 褪黑素对热应激雄鼠的精子及胚胎发育的影响

4．4 热应激及褪黑素添加对体外培养胚胎发育的影响

5 结论

参考文献

在读期间发表的论文

作者简历

致谢