侧孢短芽孢杆菌S62-9微生态特性研究

摘要

近年来，抗生素在养殖业中的滥用现象日益突出，造成养殖动物机体抵抗力及生产能力下降、致病菌耐药性增强、动物类食品药物残留增加，引发诸多的食品安全问题，严重影响人类健康和养殖业的发展，因此，开发新型绿色环保的饲料添加剂已迫在眉睫。微生态制剂具有无毒副作用、无耐药性、无残留以及效果显著等诸多优点，已成为抗生素较为理想的替代品而被广泛应用。
　　本论文以实验室选育的B.laterosporus S62-9为研究对象，体外评价其主要的微生态学特性，为其微生态制剂的开发奠定理论基础。主要内容如下:
　　(1)测定了B.laterosporus S62-9在普通营养肉汤培养基中，37℃，240 r/min振荡培养条件下的生长曲线，结果显示，B.laterosporus S62-9在0～4h处于延滞期，之后进入对数生长期，到14 h左右逐渐进入稳定期，此后菌落数基本不再变化，符合微生物典型生长曲线的特征。
　　(2)通过指示平板法测定了B.laterosporus S62-9的抑菌谱，发现其对17株细菌和2株真菌具有抑制作用，对G+菌的抑菌效果普遍优于G-菌，对常见的致病菌如金黄色葡萄球菌、链球菌、单增李斯特氏菌和大肠杆菌的抑菌效果较明显，对益生菌植物乳杆菌不表现抑菌作用。
　　(3)选取了1株藤黄微球菌28001(G+)和1株大肠杆菌CMCC44752(G-)作为指示菌，通过液态共培养法研究B.laterosporus S62-9对2株菌的抑菌能力。结果表明，丑laterosporus S62-9对2株指示菌均表现出强烈的抑菌作用，抑菌效果随其所占接种比例的增加而增强，抑菌机理包括营养竞争作用以及B.laterosporus S62-9产生的抗菌肽的拮抗作用。
　　(4)研究了B.laterosporus S62-9的耐热性以及对消化道环境的适应性，结果表明，B.laterosporus S62-9在85℃下水浴5 min，存活率达到（86.2±12.1）％;在pH2.0的人工胃液中作用4h后，存活率达到（85.7±1.1）％;在胆盐浓度为0.3％的人工肠液中作用4h后，存活率高达（88.3±2.3）％。可见，B.laterosporus S62-9具有良好的耐热性，减少了制粒过程中的损失;且对消化道环境具有较好的耐受性，为其在肠道内定植并发挥功效提供了良好的先决条件。
　　(5)体外模拟了B.laterosporus S62-9对Caco-2细胞的黏附作用，发现1个Caco-2细胞上平均黏附（20.7±3.0）个B.laterosporus S62-9，与参考菌株相比，表现出良好的黏附特性，并且该菌营养体的黏附能力高于芽孢状态。
　　(6)通过微量肉汤稀释法测定了B.laterosporus S62-9对7大类兽用抗生素的敏感性，结果表明，B.laterosporus S62-9对常见的兽用抗生素均未产生耐药性，在生物安全性方面上被认为不存在可转移的抗生素耐药性基因，是安全的菌株。
　　综上所述，B.laterosporus S62-9具有广谱、高效的抑菌特性，具备良好的耐热性、消化道环境适应性以及黏附特性，不存在可转移的抗生素耐药性基因，因此，B.laterosporus S62-9初步具备开发为微生态制剂的标准和要求，可作为微生态制剂制备的优良菌种。

目录

声明

摘要

1 引言

1．1 微生态制剂简介

1．1．1 微生态制剂定义

1．1．2 微生态制剂的种类及作用机理

1．1．3 微生态制剂菌种的选择

1．1．4 影响微生态制剂应用效果的主要因素

1．1．5 微生态制剂的评价指标

1．1．6 微生态制剂的应用

1．2 芽孢杆菌及其微生态制剂

1．2．1 芽孢杆菌

1．2．2 侧孢短芽孢杆菌

1．2．3 芽孢杆菌微生态制剂及其应用

1．3 本课题研究目的及意义

1．4 技术路线

2 材料与方法

2．1 试验材料

2．1．1 试验菌种

2．1．2 试验细胞

2．1．3 培养基

2．1．4 主要试剂

2．1．5 主要仪器设备

2．2 试验方法

2．2．1 B．laterosporus S62-9生长曲线的测定

2．2．2 指示平板法[62]测定B．laterosporus S62-9抑菌谱

2．2．3 液态共培养法[65-67]研究B．laterosporus S62-9抑菌活性

2．2．4 B．laterosporus S62-9耐热性研究

2．2．5 B．laterosporus S62-9对人工胃液耐受性的研究

2．2．6 B．laterosporus S62-9对肠道内胆盐耐受性的研究

2．2．7 B．laterosporus S62-9模拟食物在动物胃肠道消化过程的耐受性

2．2．8 B．laterosporus S62-9体外黏附性研究

2．2．9 B．laterosporus S62-9对常见兽用抗生素敏感性研究

3 结果与分析

3．1 B．laterosporus S62-9生长曲线的测定

3．2 指示平板法测定B．laterosporus S62-9抑菌谱

3．3 液态共培养法研究B．laterosporus S62-9抑菌活性

3．3．1 B．laterosporus S62-9对藤黄微球菌28001的抑菌活性研究

3．3．2 B．laterosporus S62-9对大肠杆菌CMCC 44752的抑菌活性研究

3．4 B．laterosporus S62-9耐热性研究

3．5 B．laterosporus S62-9对人工胃液耐受性的研究

3．6 B．laterosporus S62-9对肠道内胆盐的耐受性研究

3．7 B．laterosporus S62-9模拟食物在动物胃肠道消化过程的耐受性

3．8 B．laterosporus S62-9体外黏附性研究

3．8．1 菌悬液的制备

3．8．2 Caco-2细胞的培养

3．8．3 黏附性研究

3．9 B．laterosporus S62-9对常见兽用抗生素敏感性研究

4 讨论

4．1 B．laterosporus S62-9抑菌谱及抑菌活性

4．2 B．laterosporus S62-9耐热性及消化道环境适应性

4．3 B．laterosporus S62-9体外黏附性

4．4 B．laterosporus S62-9对常见兽用抗生素敏感性

致谢

5 结论

参考文献

在读期间发表学术论文

作者简介

致谢